【背景】胆系肿瘤是指胆道系统的恶性肿瘤,包括肝内胆管癌、肝外胆管癌、胆囊癌及壶腹癌。此类肿瘤恶性程度极高,大约只有10%左右的患者有根治性手术的机会,对于已有转移的患者来说,治疗手段有限,治疗效果不尽如人意。且即使行根治性切除的患者,复发率也是相当高。自ABC-02研究结果报道以来,吉西他滨联合顺铂近年来一直被推荐为一线化疗方案,但尽管如此,生存期也未超过一年。靶向药物虽层出不穷,但临床研究结果显示疗效并不满意。自Rosenberg SA在1985年首次报道淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine-activated killer cells,LAK)联合IL-2治疗恶性黑色素瘤的临床研究结果之后,近年来,免疫细胞治疗受到了极大的关注,并已成为与手术、放疗和化疗并列的肿瘤第四大治疗模式。传统的手术、放疗及化疗能够降低一定的肿瘤负荷,但并不能杀死全部的肿瘤细胞,免疫治疗的意义在于是通过人为的因素,调动和激活机体自身的免疫系统,增强抗肿瘤的免疫效力,进而达到控制和杀伤肿瘤细胞的目的。肿瘤免疫细胞治疗是通过对患者外周血单个核细胞进行体外筛选,采用IL-2、抗CD3单抗、特异性多肽等激活剂进行诱导、激活和扩增,然后重新输回肿瘤患者体内,来激发机体自身的免疫系统,促使其在体内发挥杀伤肿瘤细胞的作用,同时增强机体自身免疫功能,激活免疫细胞长期监控肿瘤,起到预防复发及转移的作用。目前临床上应用较多的有LAK细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL)、细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK)、树突状细胞(dendritic cells,DCs)及细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic lymphocyte,CTL)等。过继免疫细胞作用机理相对明确,具有突出的临床安全性,并能与手术、放疗和化疗有效地结合,显示出了良好的临床应用前景。本课题主要分两部分:第一部分观察过继细胞免疫治疗联合化疗和单纯化疗在胆系肿瘤患者中的临床疗效,比较两组的总生存期(Overall survival,OS)、无进展生存期(Progression-free survival,PFS)、疾病控制率(Desease control rate,DCR)、生活质量变化、免疫功能变化以及不良反应,为胆系肿瘤生物免疫治疗提供临床依据;第二部分对胆系肿瘤目前的免疫治疗现状进行总结及综述。第一部分胆系肿瘤过继细胞免疫治疗联合化疗的临床疗效观察及研究【目的】对树突状细胞(DC)疫苗及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合化疗在胆系肿瘤治疗中的临床疗效进行观察及研究,并复习文献,与单纯化疗的数据进行对比。【方法】收集2012年1月至2014年10月东方肝胆外科医院生物治疗科收治的62例行化疗+DC-CIK细胞治疗的胆系肿瘤患者(联合治疗组),首先采集外周血中单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),然后进行化疗,收集的PBMCs经过体外扩增、培养,用多抗原负载,收获成熟DC制成疫苗并皮下注射,同时静脉回输过继免疫细胞CIK。另外选取62例单纯化疗的患者(对照组),该组仅行化疗。观察两组患者的总生存期、无进展生存期,疾病控制率,治疗前后的生活质量变化、外周血淋巴细胞亚群、调节性T细胞水平变化及不良反应。【结果】免疫细胞联合化疗组中位总生存期及中位无进展生存期均较对照组延长(16.3 vs11.0个月;10.0 vs 7.0个月),两组差异有统计学意义。联合治疗组疾病控制率较对照组提高(87.1%vs 77.4%),且生活质量较治疗前及对照组均有改善(P<0.05)。联合治疗组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+比例及CD4+/CD8+比值均较治疗前增加,Treg较前下降(P<0.05),与对照组比较有统计学差异。联合治疗组化疗不良反应较单纯化疗组明显减少(P<0.05),免疫细胞回输不良反应较少,主要以一过性低热为主,大多无需进行特殊处理,可自行恢复。【结论】过继免疫细胞联合化疗是胆系肿瘤有效的治疗手段,较单纯化疗可明显延长总生存期及无进展生存期,提高疾病控制率,改善生活质量及机体免疫状态,对控制免疫耐受的Treg可起到杀伤作用,且不良反应小,临床耐受性良好。过继免疫细胞治疗目前仍缺乏合理的疗效评价体系,与传统手术及放化疗的疗效评价不尽相同,所以,即使在治疗过程中出现肿瘤进展,过继免疫治疗仍可继续,并有望从中获益。第二部分综述:胆系肿瘤免疫治疗的现状对于胆系肿瘤来说,仅有少部分患者有机会行根治性手术,无法手术切除或者转移的患者治疗手段非常有限。肿瘤免疫学的发展使得肿瘤浸润免疫细胞在胆系肿瘤中成为治疗反应和预后的指标。这也促进了免疫疗法的发展,着力于增强胆系肿瘤的免疫系统。包括多肽疫苗和树突状细胞疫苗,刺激体内针对肿瘤特异性抗原的免疫反应。在胆系肿瘤中已经形成了通过体外扩增肿瘤浸润免疫细胞,然后回输到体内,再辅以细胞因子治疗的过继免疫治疗。临床研究表明,这种类型的治疗一般耐受性良好。以树突状细胞为基础的疫苗和过继免疫治疗联合的治疗已显示出良好的潜力。新的策略通过发现新的靶抗原和逆转肿瘤相关的免疫抑制可以提高免疫治疗在胆系肿瘤中的疗效。通过有针对性地胆道肿瘤免疫分子分析一体化协同努力,希望在这种高度致死性疾病的治疗过程中做出积极影响。基于以上两点,本课题的主要结论为:免疫治疗是胆系肿瘤的一种有效治疗方法,是手术及化疗的有效补充,并且不良反应小,临床耐受性良好。