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先天性免疫系统是机体对抗微生物入侵的第一道防线,在宿主抗感染应答的初期阶段起重要作用。先天性免疫系统能通过宿主细胞的模式识别受体(PRR)识别病原体上一些不易改变的特殊分子结构,比如病毒的DNA与RNA,这些抗原分子统称为病原体相关的分子模式(PAMP)。目前已经鉴定出三大类模式识别受体:Toll样受体(TLRs)、Nod样受体(NLRs)和RIG样解旋酶(RLHs)。病毒侵染和复制时,存在于内涵体上的TLR3、7与8、9能分别识别内吞进内涵体的RNA和DNA病毒,而存在于细胞质内的RIG-Ⅰ和MDA5等也能间接或直接地感知体内的DNA与RNA病毒。识别病毒后,这些受体通过各自的接头蛋白TRIF、MyD88、MAVS等将信号转递给下游的激酶NEMO、TBK1等,这些激酶又激活相应的转录因子,激活后的转录因子入核启动IFN-β等抗病毒基因的转录。这条通路中的转录因子主要包括IRF3、NF-κB等,TLRs和RLHs传递的信号都是经过这几种转录因子激活下游基因的转录反应的。在过去的一二十年里,人们鉴定出这一先天性免疫信号转导通路。然而,迄今为止对TBK1激酶如何被受体RIG-Ⅰ及其接头蛋白MAVS激活还不清楚。
本论文主要研究Tom70分子是如何介导线粒体抗病毒蛋白MAVS激活下游蛋白激酶TBK1及转录因子IRF3的。通过免疫共沉淀、SDS-PAGE、银染和质谱分析,我们鉴定出MAVS信号转导复合物中的一个新成员Tom70。我们的研究表明,病毒或poly(I:C)刺激下Tom70能与MAVS发生特异性相互作用。过表达Tom70能协同增强下游转录因子IRF3的激活,而通过siRNA降低Tom70的蛋白水平则会导致IRF3调节基因的表达下降。从机制上看,Tom70通过其Clamp结构域(R192A)与Hsp90的C端序列(EEVD)相互作用,由此招募TBK1/IRF3到线粒体上。更重要的是,打断这一相互作用或将Tom70错误定位到细胞的其他区域会严重损害IRF3的激活。此外,我们还发现Tom70对于宿主细胞发挥正常的抗病毒能力来说是必需的。综上所述,我们鉴定出Tom70是一个连接MAVS与TBK1/IRF3的关键接头分子,并进一步确证了线粒体与抗病毒先天性免疫的密切关系。