论文部分内容阅读
[目的]Wnt/β-catenin信号通路在肠隐窝细胞再生的维持中发挥重要作用,但其在损伤后的肠上皮细胞中的作用了解甚少。本研究探讨Wnt/β-catenin信号通路对腹腔间隔室综合征(ACS)大鼠模型肠隐窝干细胞再生的作用。[方法]1.建立ACS模型:以江苏鱼跃台式血压计为基础制作简易腹内测压计,建立大鼠腹腔间隔室综合征(ACS)模型;2.动物分组及手术处理:将48只SD雄性大鼠随机分为假手术(sham)组和ACS组(腹内压20 mm Hg),每组24只。ACS组按维持气腹时间0.5 h、2h、4h和6h分为4组,每组6只SD大鼠;sham组仅进行手术过程,不进行腹内高压处理;ACS组于左下腹接上测压装置与腹腔联通并注入一定量的氮气,动态监测并维持IAP恒定,直至预定时间:3.检测内容及方法:各组大鼠按腹内压持续时间分别于0.5 h、2 h、4 h、6 h处死,于心脏采动脉血做血液生化分析;进行灌注取材进行形态学染色;取回肠组织做Q-PCR及Wester Bolt检测Wnt通路关键因子Wnt-1、β-catenin、转录因子4(TCF4)和c-Myc的mRAN及蛋白变化;最后用免疫荧光技术检测了β-catenin和c-Myc在回肠表达的部位及表达量的变化。[结果]1.在腹内压20 mm Hg维持6小时后,sham组血清TP为65.87±7.40g/L,ALB为28.9±1.31g/L,ALT为78.3±8.85U/L,AST为256.17±9.56 U/L,UREA为13.70±1.34mM,CREA为 24.43±1.06umol/L,CK为 742.63±51.35U/L,α-HBDH 为 366.37± 120.23 U/L,ACS 组 TP 为 82.45±2.95g/L(P<0.01),ALB 为 37.23 ±0.46 g/L(P<0.01),ALT 为 659.2±26.56U/L(P<0.01),AST为 948.47±67.72U/L(P<0.01),UREA为 20.30±1.06mM(P<0.01),CREA为43.76±4.13umol/L(P<0.01),CK为1948.01±90.66U/L(P<0.01),α-HBDH为747.27±38.24U/L(P<0.01),两组比较具有明显差异;2.在光学显微镜下观察,sham组回肠粘膜未见明显损害,显示正常柱状上皮,然而ACS组显示,随时间延长,暴露于腹内高压中的回肠绒毛损伤越严重;3.同时ACS组损伤显示肠粘膜中Wnt-1、β-catenin、TCF4和c-Myc的mRNA和蛋白表达量存在改变,表现为先增加后减少;4.免疫荧光染色证实了肠道隐窝干细胞内β-catenin和c-Myc的表达量改变。[结论]1.通过血液生化分析,ACS模型的肝、肾、心脏和其他器官受到了损伤,同时形态学染色显示ACS导致肠道粘膜损伤,这种损伤随时间加重;2.ACS损伤早期,Wnt/β-catenin信号通路通过肠隐窝干细胞参与肠上皮的再生,但随着时间的推移这种作用被逐渐抑制;3.本研究首次证实ACS肠损伤后β-catenin的表达变化。