人抗凝血酶III(Human Antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)存在于人血中,是参与生理性凝血并控制凝血的重要因子,作为血液凝固系统的主要抑制剂,其所发挥的抗凝作用约占体内总抗凝物质作用的80%左右,是人体内的主要抗凝血成分。AT Ⅲ缺乏在临床上会表现出各种临床症状,其适用于体内AT Ⅲ活性低于正常人水平70%以下的病人,全球范围内患有AT Ⅲ缺乏的人群约为正常人群的1／2000-1／5000。AT Ⅲ主要用于遗传性抗凝血酶缺乏和获得性抗凝血酶缺乏。目前欧洲药典、美国药典,日本药局方均已收载AT Ⅲ产品,而且全球主要的20个血液制品厂中已有四分之三的企业生产AT Ⅲ以供临床需求。然而,国内无产品上市。本研究以血浆为原料,旨在确定出AT Ⅲ的生产工艺,生产出符合临床患者需求的产品,将会带来巨大的社会效益与经济效益。本课题的主要研究内容和成果简要介绍如下：(1)分析公司目前血液制品生产工艺中各组分的AT Ⅲ分布情况,确定制备AT Ⅲ的原料。通过查阅文献,对比国外该产品的工艺路线,综合考虑公司现状,通过对多批次去除冷沉淀后血浆、DEAE Sephadex-A50吸附后血浆进行效价检测,同时评估了原料的选择对公司现有产品线的影响,最终选定A50吸附后血浆,采用亲和层析捕获目标产品,可目的性获得高回收率的AT Ⅲ产品。同时,不影响公司整个工艺主线上人凝血因子Ⅷ (Human coagulation factor Ⅷ)产品及下游产品人血白蛋白(Human Albumin, HA)、静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin, IVIG)等的生产,能够充分利用现有资源,进一步实现血浆综合利用率的提高,一方面为企业带来经济效益同时也将产生一定的社会效益。(2)经分离纯化研究和处方制剂工艺研究,最终确定了AT Ⅲ工艺路线,得到了高纯度的AT Ⅲ产品。本研究从制备AT Ⅲ的原料到制备出原液的分离纯化研究,再经处方制剂工艺研究,采用不同的试验设计,确定原液生产各步骤的参数范围及处方制剂工艺,最终确定生产工艺路线为：血浆→离心去除冷沉淀→DEAE Sephadex-A50吸附→过滤→Capto Heparin亲和层析→超滤→有机溶剂／去污剂法(S／D)灭活病毒→apto Q离子交换层析→超滤→纳米膜过滤→原液→配制→除菌过滤、分装→冻干→出柜,轧盖→干热病毒灭活→外观检查→入库。成品AT Ⅲ效价比活性高达6 IU／mg蛋白以上。(3)确定AT Ⅲ生产工艺的最佳病毒灭活方法,并采用先进的纳米膜过滤去除病毒技术,验证其病毒灭活效果。为确保血液制品的安全性,生产工艺中通常采用多种不同机制的方法联合应用。本研究最终选取了S／D处理法与干热法(冻干制品),分别用于脂包膜和非脂包膜病毒的灭活。另外采用先进的纳米膜过滤去除病毒技术,对细小病毒进行了有效的去除,进一步确保产品的安全性。病毒灭活／去除效果均委托中国医学科学院输血研究所进行预验证,病毒灭活／去除效果可达到国家相关要求。(4)通过中试放大制备样品,进行质量及稳定性研究。经过三批中试规模放大验证整个生产工艺的可行性,对制备的三批AT Ⅲ产品进行全面质量检定并与国外已上市产品进行质量对比研究,开展25℃的加速及2-8℃的长期稳定性研究。结果表明：本研究确立的生产工艺具有可行性,适合放大生产,生产出的3批产品的全部质量指标均符合拟定的质量标准要求,关键质量指标检定结果优于国外已上市的产品,加速及长期稳定性研究过程中产品稳定性良好。