羊布鲁氏菌M5株omp31-2基因原核表达载体的构建及表达

来源 :内蒙古医学院 内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youzheng123
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目的:构建携带羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白OMP31-2编码基因(omp31-2基因)的原核表达载体,诱导目的蛋白的表达,为后续研究奠定一定的实验基础。   方法:根据GeneBank公布的绵羊种布鲁氏菌omlp31-2基因序列,设计PCR引物。以羊种布鲁氏菌M5菌株基因组为模板,经PCR方法扩增目的基因,将目的基因与载体pMD19-T连接,得到重组质粒pMD-omp31-2,分别采用PCR和酶切的方法鉴定重组质粒。重组质粒经双酶切后,用T4 DNA连接酶将目的基因与原核表达载体pET32a连接,得到重组载体pET32a-omp31-2,IPTG诱导目的基因的表达,SDS-PAGE电泳方法检测表达产物。   结果:(1)通过对omp31-2基因的测序表明:omp31-2基因含有723个bp,与国际标准菌株绵羊种(63/290)的omp31-2基因有6个bp不同,二者核苷酸序列同源性达99.76%;该基因与国际标准菌株羊种、犬种omp31-2基因核苷酸序列同源性达99.86%,与国际标准菌株猪种、沙林鼠中、海洋种相应基因核苷酸序列完全相同。(2)成功构建原核表达载体,并诱导目的基因的表达。   结论:成功地构建了羊布鲁氏菌M5菌株omp31.-2基因的原核表达载体,并诱导目的基因的表达,为后续研究奠定了一定的实验基础。
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