【摘 要】
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第一部分质粒pc DNA3.1/EGR-1的构建和转染目的:构建质粒pc DNA3.1/EGR-1并将其导入卵巢癌SKOV3细胞中。方法:构建质粒pc DNA3.1/EGR-1后通过阳离子脂质体瞬时转染SKOV3细胞
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第一部分质粒pc DNA3.1/EGR-1的构建和转染目的:构建质粒pc DNA3.1/EGR-1并将其导入卵巢癌SKOV3细胞中。方法:构建质粒pc DNA3.1/EGR-1后通过阳离子脂质体瞬时转染SKOV3细胞。结果:质粒酶切鉴定显示成功构建pc DNA3.1/EGR-1,荧光显微镜下拍片显示脂质体转染pc DNA3.1/EGR-1的转染率约为30-40%。结论:应用阳离子脂质体转染法,可较高效率转染重组质粒pc DNA3.1/EGR-1第二部分pc DNA3.1/EGR-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖、凋亡的影响目的:观察重组质粒pc DNA3.1/EGR-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖和凋亡情况的影响。方法:Annexin V-FITC/PI检测转染重组质粒pc DNA3.1/EGR-1对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染重组质粒pc DNA3.1/EGR-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖影响。结果:转染重组质粒pc DNA3.1/EGR-1使卵巢癌SKOV3细胞增殖明显下降(P<0.05);凋亡明显增加。结论:pc DNA3.1/EGR-1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进卵巢癌SKOV3凋亡。第三部分重组质粒pc DNA3.1/EGR-1在卵巢癌SKOV3细胞中的表达目的:检测目的基因EGR-1在卵巢癌SKOV3细胞中表达。方法:通过实时RT-PCR检测转染前后SKOV3细胞中EGR-1 m RNA的表达Western-blot检测转染前后SKOV3细胞中EGR-1蛋白表达。结果:通过实时RT-PCR以及Western-blot显示,转染pc DNA3.1/EGR-1卵巢癌SKOV3细胞中EGR-1表达高于非转染组。结论:转染重组质粒pc DNA3.1/EGR-1的SKOV3细胞中,EGR-1基因表达高于非转染组。
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