异基因造血干细胞移植（alloHSCT）是治疗恶性血液病的有效手段，完全相合的供者越来越少，迫使人们研究HLA半相合供源的干细胞移植。与HLA全相合比较，HLA半相合HSCT有良好的杀伤肿瘤效应。然而，HLA半相合HSCT发生移植失败和移植物抗宿主病（GVHD）的比例也相应增加。新的研究定位点是在保留半相合HSCT移植物抗白血病（GVL）的前提下，如何降低GVHD，减少移植并发症，提高移植后受者生活质量。目前采用的去除T淋巴细胞、筛选干细胞移植物和加大免疫抑制剂的用量，不能满足上述标准。新的研究方向转移到了采用免疫细胞进行调节。NK细胞具有杀伤肿瘤、抗感染的能力，但在半相合HSCT中的移植免疫调节的确切作用还不清楚，本研究在C₅₇BL／6^H-2b→CB6F₁^H-2b/d小鼠骨髓移植模型上观察供者NK细胞在半相合骨髓移植中的作用，为临床在半相合骨髓移植中应用NK细胞提供实验依据，确立NK细胞的免疫调节作用，将会使92％以上的患者得到移植治疗。 实验方法 一、供者NK细胞在小鼠MHC半相合骨髓移植造血重建及免疫耐受的研究： 制备CB6F₁^H-2b/d小鼠为受者，C₅₇BL／6^H-2b小鼠为供者。90只CB6F₁^H-2b/d小鼠经9.0Gy照射后随机分为9组，每组10只。对照组（共4组）：对照1组为单纯照射组；对照2组为半相合骨髓细胞移植组；照射后4h移植C₅₇BL／6^H-2b小鼠骨髓细胞；对照3组为同基因骨髓细胞移植组：照射后4h移植CB6F₁^H-2b/d小鼠骨髓细胞；对照4组为半相合GVHD对照组：照射后4h移植C₅₇BL／6^H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组（共5组）：实验1、2、3组为CB6F₁^H-2b/d小鼠在照射后1h内首先移植纯化第一军医大学博士学位论文的c57BLz6H-2b小鼠NK细胞，剂量分别为1 x 10今只、5 x 105/只和2 xlo今只，在照射后4h移植Cs尹L/6H一小鼠骨髓细胞;实验4、5组为照射后1h内分别移植C57BL/护一小鼠NK细胞1 xlo今只、5 x 105/只，在照射后4h移植CS尹L/护一小鼠骨髓细胞和脾细胞。以血象、体重、生存期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较。 二、供者NK细胞抗白血病作用的体内研究: 建立荷EL%11（H一Zd）红白血病细胞的cB6FIH一小鼠动物模型，30只红白血病小鼠随机分为5组，每组6只。对照组（共3组）:对照1组为未治疗组;对照2组为阿糖胞昔治疗组:小鼠注入EL9611（H一Zd）细胞后第5天开始腹腔注射阿糖胞昔50m留（kg·只）X6d;对照3组为同基因NK细胞治疗组:注射EL9611（H一Zd）细胞后第5天每只小鼠输注eB6FIH一小鼠NK细胞1又一06/只x ld。实验组（共2组）:实验l、2组为注射 EL9611（H一Zd）细胞后第5天每只小鼠输注Cs7Bu护一小鼠NK细胞，剂量分别为2 x 105/只xld、5 xlo今只xld。以血象、体重、生存期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较。 三、供者NK细胞对小鼠半相合骨髓移植的GVHD与GVL的作用: 建立荷EL%11（H一Zd）红白血病细胞的cB6FIH一小鼠动物模型，5天后随机分为7组，每组10只，移植组在gGy照射后行Cs7BL/护-2b一cB6FIH^方向骨髓移植。对照组（共5组）:对照1组为未治疗组;对照2组为单纯照射组;对照3组为阿糖胞昔治疗组:小鼠腹腔注射阿糖胞昔50mg/（kg·只）X6d;对照4组为单纯骨髓细胞移植组:小鼠照射后4h移植C57BL/6H-2b’J、鼠骨髓细胞;对照5组为GvHD对照组:小鼠照射后4h移植CS尹u6H一小鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组（共2组）:实验1组，照射后输注CS旧u6H-2b小鼠NK细胞1 x 10今只，4h后移植C57BL/护一小鼠骨髓细胞;实验2组:照射后同实验1组，4h后移植C57Bu6H-Zb小鼠骨髓细胞和脾细胞。以血象、体重、生存期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较。 四、供者NK细胞促进小鼠半相合骨髓细胞植入: 制备cB6FIH一确小鼠为受者，C57BL/6H一小鼠为供者。60只小鼠根据不同照射剂量及不同NK细胞输注量分为10组。对照组（共6个组）:对照1、3、5组均为单纯照射组，照射剂量分别为gGy、7Gy、6Gy;对 6第一军医大学博士学位论文照2、4、6组均为半相合骨髓细胞移植组:照射后4h移植骨髓细胞，照射剂量分别为gGy、7Gy、6Gy;实验组（共4各组）:实验1、3组，照射后lh内移植Cs7Bu护一小鼠NK细胞1 x 10今只，4h后移植C57BL/6H一2b小鼠骨髓细胞，照射剂量分别为7Gy、6Gy;实验2、4组，照射后lh内移植e57BL/OH一b小鼠NK细胞5 x 105/只，4h后移植e57BL/6H一小鼠骨髓细胞，照射剂量分别为7Gy、6Gy。以血象、生存期和嵌合体比例为观察指标并作组间比较。实验结果 一、供者NK细胞在MHC半相合骨髓移植造血重建及免疫耐受的研究: 1.生存期:在半相合移植模型上证实，对照1组为（5.巧士0.66）d，对照4组为（15.80士1.93）d，其他组小鼠生存期均大于3Od: 2.病理学结果，对照4组出现典型的GVHD病理表现，其他各组均无GVHD病理表现; 3.移植后+10d时白细胞及血小板计数:对照2组WBC为（0.9妊0.22）x 109几、PLT为（61.肚7.27） x 10玩。实验1、2、3组wBe计数分别为（2.01士0.21）x log/L、（1.95切.29）xlog/L、（1.97土0.21）、log/L;PLT计数分别为(101