GFP转基因小鼠CD34~+细胞的培养及其特性的研究

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[目的]:为了探讨造血干细胞的生物学特性及bFGF、PDGF表达与血液肿瘤的关系,故检测绿色荧光转基因小鼠骨髓单个核细胞的bFGF、PDGF的表达。[方法]:取绿色荧光蛋白(green fluorescent poretn,GFP)转基因小鼠骨髓,制备细胞悬液,经pecroll细胞分离液分离,在免疫荧光显微镜下观察细胞的生长情况,计数细胞。采用免疫细胞化学染色法进行CD34~+单克隆抗体鉴定。并培养和收集1d、5d、7d和10d的细胞,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测造血干细胞中bFGF及PDGF基因mRNA的表达情况。[结果]:1、在细胞培养的各个时间点中,免疫组化法染色显示培养7d时可见细胞涂片中的绿色荧光细胞中CD34~+细胞百分率>76%,达到高峰。2、收集培养1d、5d、7d和10d的细胞,RT-PCR检测结果显示:四个时间段所收集的细胞均有bFGF及PDGF的mRNA的表达。3、测量灰度结果显示:培养7d的细胞bFGF、PDGF的mRNA表达达高峰,10d开始回落。[结论]:1、经pecroll细胞分离液分离12h首次全量换液、体外培养的GFP转基因小鼠骨髓悬浮细胞中所含CD34~+细胞纯度较高、数量较多。且在培养4d时,生长情况最佳;培养7d时CD34~+细胞最多。2、GFP转基因小鼠骨髓单个核细胞稳定表达bFGF及PDGF的mRNA,并在培养7d时达高峰,与CD34~+细胞数占培养细胞总数百分比成正相关。3、bFGF促进造血干细胞的生长;PDGF促进细胞的分裂与增殖。
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