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垂体细胞因子参与垂体激素合成分泌和垂体瘤发生是近年来免疫—神经—内分泌网络领域中的研究热点。许多体内外实验证实，正常垂体和垂体瘤组织中存在细胞因子及其受体，这些细胞因子单独或协同下丘脑激素激活垂体合成释放激素，但到目前为止，这一领域的研究主要集中于大体或细胞水平，细胞因子影响垂体细胞功能的分子调控机制尚未见报告。本实验以小鼠垂体ACTH瘤细胞系(AtT20)为模型，旨在研究白细胞介素1β(IL1β)对POMC(ACTH激素前体分子)基因表达，尤其是对POMC基因转录调控的影响，初步探讨IL1在垂体ACTH瘤POMC基因表达调控中的作用，也为免疫—神经—内分泌网络提供分子学依据。 本实验首先利用放射免疫分析法(RIA)以及RT-PCR和Southern杂交方法检测人重组白介素1β(rhIL1β)对AtT20细胞ACTH分泌和POMC基因mRNA表达量的影响。结果显示，从1小时到12小时，rhIL1β(0.1pmol／L～1000pmol／L)剂量依赖性引起AtT20细胞ACTH分泌升高，1000pmol／L rhIL1β作用3小时后引起POMCmRNA表达量逐渐增加。提示3小时以后IL1β诱导ACTH分泌增高主要是作用于转录水平。 为进一步研究IL1β诱导POMC基因转录的调控机制，首先要构建POMC基因调控序列的报告质粒。我们利用合适的单一酶切位点，将JA300质粒上含有的大鼠POMC(rPOMC)基因5’上游近端调控序列-480／+63bp片段克隆到荧光素酶报告基因真核表达质粒PGL2—Basic载体上，构建了PGL2—POMC480质粒以及-480／+63bp片段不同长度缺失的PGL2—POMC323，PGL2—POMC165，PGL2—POMC34质粒。限制性酶切图谱分析和核苷酸序列测定鉴定上述质粒克隆成功。以Lipofectamin方法将报