目的：本课题旨在建立适用于本实验室的临床常见酵母样真菌的ITS基因检测方法,通过与质谱法、API体系和念珠菌显色平板培养法相比,评价其临床应用价值。同时,初步探讨ITS基因测序法直接检测临床标本的应用前景。方法：首先,设计一对针对多种常见酵母样真菌ITS基因的通用引物,要求扩增的目的片段长度约400—600bp,片段的核酸序列具有种间多样性,能到达通过测序来区分不同种酵母样真菌的目的,并以16标准菌株对引物进行测试。其次,收集135株临床的分离阳性菌株,同时用质谱法、API体系和念珠菌显色平板培养法方法进行检测,比较各种鉴定方法的准确率和灵敏度。最后,收集20份经实验室常规鉴定的阳性临床标本,再用ITS基因测序法直接进行鉴定,评价测序分析法直接检测临床样本的鉴定效果。结果：设计的ITS基因扩增引物成功扩增与鉴定出所有的标准菌株。对135株临床分离的阳性菌株的鉴定中,ITS测序、质谱法、API体系和念珠菌显色平板培养法方法阳性率分别为98.5%(133/135),78.5%(106/135),59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P<0.05)。其中有1株MS未能鉴定的菌,经ITS基因扩增测序后,鉴定为皮炎外瓶霉菌。运用ITS测序方法还成功从20份原始标本中鉴定出致病酵母菌,与其他方法的检测结果一致。结论：ITS序列分析方法能快速、准确地鉴定多种临床酵母样真菌。该方法在不经培养,直接从原始标本中进行检测及鉴定的方向上也有重要的应用前景,是一种可促进临床快速诊断致病真菌感染的方法。