拟南芥核转运蛋白AtIMPA在植物免疫中的功能研究

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农业生产中病害造成巨大经济损失及粮食减产,植物抗病性利用是控制病害的有效途径,减少经济损失。经典核转运是将货物蛋白由细胞质转运进核质的过程,在此过程中转运蛋白importinα、importinβ与货物蛋白形成异源三聚体向细胞核靠拢,由importinβ导向核孔蛋白。Importinα具有识别核定位信号的功能域,进而介导货物参与核转运过程,植物在免疫反应中的信号传递离不开核转运机制。本课题聚焦于拟南芥核转运蛋白AtIMPA进行研究,探究其对于拟南芥抗病性的影响。主要研究结果如下:(1)拟南芥AtIMPA属于拟南芥核转运蛋白importinα家族。序列比对及进化树分析表明AtIMPA具有Arm重复序列及IBB结构域,是核转运蛋白特异保守结构域。生物信息学预测AtIMPA在拟南芥根、茎、叶、花、角果等组织中均有表达,且在叶中表达量最高。通过AtIMPA-GFP融合蛋白荧光信号检测拟南芥根、叶、花等组织,发现均有荧光信号,与预测分析结果一致。将瞬时表达载体注射烟草叶片进行亚细胞定位分析,发现AtIMPA在核高度表达,定位区域与AtIMPA的核转运功能相符合。(2)AtIMPA突变降低拟南芥对丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pst DC3000)的抗性。AtIMPA响应Pst DC3000被诱导表达,筛选出突变体atimpa、过表达植株后,浸菌接种Pst DC3000显示AtIMPA突变降低拟南芥抗性,ABA与Pst DC3000处理显示AtIMPA不参与气孔关闭。注射接种Pst DC3000后突变体比野生型更感病。接种Pst DC3000进行胼胝质染色,过表达植株累积的胼胝质多于野生型,而突变体胼胝质积累量最少,说明AtIMPA是通过参与质外体免疫来影响拟南芥对PstDC3000的抗性。(3)AtIMPA突变影响拟南芥SA、JA相关基因的表达。在检测接种Pst DC3000后拟南芥各防卫基因表达量,发现AtIMPA突变显著抑制SA合成基因EDS1及抗性相关基因NPR1和PR1表达,JA信号通路标记基因AOC1、JAZ3、MYC2也受到抑制或上调,在使用外源Me JA处理下突变体根长较野生型受抑制更明显。这些说明AtIMPA参与SA、JA信号通路介导的抗病防卫反应。综上,本研究发现拟南芥核转运蛋白AtIMPA通过影响SA、JA通路及质外体胼胝质积累进而介导拟南芥对Pst DC3000的抗性,为揭示核转运蛋白在植物免疫中作用机制提供理论基础。
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