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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)在临床症状上主要表现为流产、早产、死胎、产木乃伊胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸系统病变等。由于猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)具有嗜巨噬细胞性、野生毒株的抗原多变性、抗体依赖性增强作用(ADE)和持续性感染等特征而使针对此病的预防、治疗以及有效疫苗的研制困难重重,至今仍然没有一个有效消灭此病的方法。本研究旨在:(1)分析华东地区部分猪场PRRSV-GP5基因的变异趋势;(2)表达和纯化可作为ELISA包被抗原的PRRSV-GP5蛋白,制备可用于间接免疫荧光检测PRRSV病毒的抗GP5多抗;(3)分离鉴定并获得PRRSV流行毒株。用RT-PCR方法对流行于华东地区部分猪场的PRRSV GP5基因进行了扩增、克隆和序列分析。结果表明,2004-2007年间检测的PRRSV毒株均属于北美洲型,大部分毒株属于亚群1,亚群1各毒株间的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.6-100%和90.7-99.5%,亚群1与最早分离到的北美洲毒株VR2332的核苷酸和氨基酸同源性分别为88.1-90.2%和85.8-89.6%。将PRRSV结构蛋白GP5基因截短后克隆至表达载体pET-30a,转化大肠杆菌,并经IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳显示,重组蛋白得到了高效表达。纯化后的目的蛋白浓度达到87.5mg/L重组菌培养液。Western blotting和间接ELISA分析表明,重组蛋白与抗PRRSV阳性血清能够发生反应。制备的抗GP5蛋白多克隆抗体,抗体效价高达1:32768,可用于PRRSV的间接免疫荧光检测。将RT-PCR检测为阳性的病料接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),进行了间接免疫荧光试验、电镜观察和毒价测定。结果表明,我们在接种细胞中扩增到了特异性的GP5基因的目的片断,在细胞浆中观察到了特异性免疫荧光,在电镜下病毒粒子的大小约为60nm。非结构蛋白2(NSP2)有29个氨基酸的缺失病毒在Marc-145细胞中经48小时培养形成明显的细胞病变,10代培养后的毒价为104.59 TCID50/ml。本研究结果为进一步研究PRRSV的变异、致病机理和免疫预防提供了一定的基础。