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抑郁症(depression)是一种常见的神经精神疾患,由于时代发展的速度和社会进程的加快,人们生活的压力增加,抑郁症历年的发生率上升趋势明显,预计到2020年将成为继心血管疾病之后的全球第二大致残率的疾病,不仅给个人和家庭带来痛苦,还加重了社会负担。然而现代医学对抑郁症的发病机制仍处于假说阶段,用药存在起效慢、副作用大等缺陷,治疗尚未成熟,因此寻求快速有效安全的抑郁症治疗方法成了亟待解决的问题。传统中医药的经典方剂越鞠甘麦大枣汤(YG),具有行气解郁、宁心安神的功效,在基础和临床抗抑郁治疗中都取得了良好的效果。然而其抗抑郁的快速性和作用机制尚不明确,本研究旨在评价越鞠甘麦大枣汤的快速抗抑郁作用,以及确定NMDA/NO/cGMP信号通路在越鞠甘麦大枣汤抗抑郁中的作用。目的1.证明越鞠甘麦大枣汤具有快速持久的抗抑郁作用。2.越鞠甘麦大枣汤的抗抑郁与NMDA/NO/cGMP信号通路有关。3.越鞠甘麦大枣汤抗抑郁用药量的性别差异方法 与研究目的对应,本实验由以下部分组成:1.运用悬尾测试(TST)和强迫游泳测试(FST),检测越鞠甘麦大枣汤给药后的不动时间变化,以确定最佳的抗抑郁剂量,然后与西药氯胺酮比较抗抑郁作用的时效性。2.Western Blot检测单次给药后小鼠海马组织NMDA受体亚单位(NR1,NR2A,NR2B)不同时间点表达变化。3.运用习得性无助模型(LH)和慢性温和不可预知应激模型(CMS)检测单次给予越鞠甘麦大枣汤和氯胺酮24小时后行为学的改变,以及NMDA受体亚单位NR1的影响。4.分别给予NMDA/NO/cGMP对应的激动剂和拮抗剂,运用行为学检测反证越鞠甘麦大枣汤抗抑郁是否依赖NMDA/NO/cGMP信号通路的抑制作用。5.对不同性别小鼠分别给予高中低剂量越鞠甘麦大枣汤,30min后进行悬尾测试(TST)实验,2hr后进行强迫游泳测试(FST)实验,检测性别对不同剂量的YG行为学变化差异。结果1.单次给予越鞠甘麦大枣汤1.0g/kg(低剂量)、2.0g/kg(中剂量)、2.5g/kg(高剂量)三种剂量后,仅2.5g/kg组小鼠TST、FST不动时间与空白组比较显著降低,且2.5g/kg组与氯胺酮进行比较,抗抑郁作用可持续到第7天,表明YG2.5g/kg为抗抑郁最佳剂量。2.对造模成功的习得性无助模型动物给药后进行行为学检测,YG2.5g/kg逆转小鼠的逃避潜伏期和失败穿越次数;慢性温和刺激模型造模后,单次给予YG2.5g/kg,小鼠的糖水偏好显著上升,悬尾不动时间和强迫游泳不动时间缩短,摄食潜伏期缩短、摄食量增加。而自发活动实验显示给药后对动物活动总路程和中央时间不产生影响。3.单次给药后小鼠海马组织NMDA受体亚单位NR1下调从30min开始并持续至5天;而NR2A、NR2B只在30min下调。随后在抑郁症模型上检测NR1的变化,越鞠甘麦大枣汤能逆转造模后NR1的增加效应。4.分别给予NMDA/NO/cGMP对应的激动剂NMDA,L-argine或sildenafil后,YG2.5g/kg的抗抑郁作用消失;给予拮抗剂MK-801,L-NAME,7-nitroindazole(7-NI),Methylene blue(MB)后,可协同YG1.0g/kg(亚有效剂量)起到抗抑郁的作用。5.对雄性、雌性小鼠分别用不同剂量YG灌胃给药,TST、FST均显示雌性小鼠2.0g/kg就能起到减少行为学测试的不动时间,而雄性小鼠2.5g/kg才能起效。结论1.越鞠甘麦大枣汤具有抗抑郁的作用,能快速改善急慢型抑郁模型小鼠的抑郁样行为学特征。2.YG2.5g/kg的抗抑郁的作用是通过下调NMDA/No/cGMP信号通路的表达而产生的。3.越鞠甘麦大枣汤抗抑郁剂量具有明显的性别差异。