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【目的】近年来,不断有研究证明氟化物能够损伤雄性生殖系统,但它的作用机制仍不清楚。本试验主要是探索氟化物是否可以诱导睾丸组织发生线粒体自噬,以及在体内和体外试验中PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在氟化物诱导的雄性生殖损伤中的作用,为深入揭示氟的雄性生殖毒性机理提供科学依据。【方法】体内试验,8周龄雄性C57BL-6小鼠40只,随机分成4组,每组10只。试验通过饮水染氟,对照组给予去离子水,处理组分别给予含有25、50和100 mg/L NaF的去离子水。氟暴露90天后,用氨基甲酸乙酯溶液(20%)麻醉小鼠,并用断颈法处死,取其睾丸组织。使用透射电子显微镜观察睾丸组织中生精细胞、支持细胞及间质细胞线粒体超微结构的变化,以及线粒体自噬的发生情况。此外,采用组织免疫荧光实验,检测线粒体自噬标志蛋白PHB2在睾丸组织中的表达及分布情况。根据体内试验结果,进一步体外培养小鼠睾丸间质细胞TM3,采用0、0.125、0.25和0.5 Mm NaF处理。24小时后,通过JC-1实验检测线粒体膜电位变化情况;Mito Tracker Green(MTG)和Lyso Tracker Red(LTR)染色定量并定位细胞线粒体和溶酶体;免疫荧光、qRT-PCR和Western blot实验检测线粒体自噬相关基因和蛋白表达水平的变化。【结果】1.氟处理90天后,与对照组相比,各处理组生精细胞、支持细胞及间质细胞中的线粒体均出现严重的空泡化,不同程度的线粒体嵴紊乱消失及线粒体膜破碎现象。此外,经100 mg/L NaF处理后,生精细胞中出现了典型的线粒体自噬体,间质细胞在50和100 mg/L NaF处理后也出现了典型的线粒体自噬体,而在支持细胞中未观测到典型的线粒体自噬体。2.睾丸组织切片免疫荧光结果显示,随着氟暴露剂量的增加,睾丸组织中PHB2的表达量在50和100 mg/L NaF组显著升高(p<0.01),且PHB2主要表达于间质细胞中。3.MTT实验结果显示,氟处理TM3细胞24小时后,IC50=2.939 mM;NaF处理TM3细胞48小时后,IC50=1.992 mM.4.氟处理24小时后,TM3细胞JC-1染色结果显示,与对照组相比,随着NaF浓度的增加,0.25和0.5 mM NaF处理后,TM3细胞线粒体膜电位呈剂量依赖性显著下降(p<0.01);0.125 mM NaF处理对TM3细胞线粒体膜电位无明显影响。5.氟处理24小时后,TM3细胞MTG和LTR染色结果显示,与对照组相比,随着氟剂量的增加,各处理组细胞中线粒体数量显著下降(p<0.01),并且溶酶体数量显著上升(p<0.01)。此外,由MTG和LTR的共定位可以发现,随着氟剂量的增加,各处理组中被溶酶体包裹的线粒体的数量不断增加,线粒体自噬水平上升。6.免疫荧光结果显示氟处理后TM3细胞中PINK1和PHB2的表达量增加,且线粒体数量减少。qRT-PCR和Western blot结果显示,PHB2的mRNA表达量在各处理组均显著升高(p<0.01),其蛋白表达水平在0.125、0.25和0.5 mM NaF处理组呈现相似趋势,均显著上升(p<0.05,p<0.01,p<0.05)。0.5 mM NaF处理后,PINK1的mRNA和蛋白表达量显著上升(p<0.05),其他处理组无显著变化。【结论】氟可以损伤小鼠睾丸组织和TM3细胞中的线粒体,诱导小鼠睾丸组织及TM3细胞中发生线粒体自噬,且PINK1/Parkin通路参与了该线粒体自噬的发生。