【摘 要】
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研究背景:脓毒症:感染引起的系统性炎症反应综合征（systemic inflamation response syndrome,SIRS）,严重脓毒症时合并组织低灌注和多器官功能障碍,包括急性肺损伤（acute lung injury,ALI）。脓毒症病原菌中革兰氏阴性菌释放的内毒素—脂多糖为重要原因,因此调节或减轻脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）造成的系统性炎症反应成为当
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研究背景:脓毒症:感染引起的系统性炎症反应综合征（systemic inflamation response syndrome,SIRS）,严重脓毒症时合并组织低灌注和多器官功能障碍,包括急性肺损伤（acute lung injury,ALI）。脓毒症病原菌中革兰氏阴性菌释放的内毒素—脂多糖为重要原因,因此调节或减轻脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）造成的系统性炎症反应成为当前研究的热点。研究发现TLR4/NF-κB通路在LPS诱导的肺部炎症中发挥重要作用。越来越多的研究表明低分子肝素除传统意义上的抗凝作用外,还有抗炎等其他多种作用。低分子肝素在脓毒症急性肺损伤的相关作用机制尚不明确,本研究通过LPS诱导A549细胞损伤低分子肝素在肺损伤中的作用。目的:探究低分子肝素在LPS诱导的A549细胞损伤中的作用机制。方法:复苏培养A549细胞株,观测细胞生长状况,待细胞增长至对数期,消化、离心后,将细胞浓度调整至5 × 104/ml。实验设为四组,每组分别设置2个复孔,置于细胞培养箱内培养至贴壁。每组干预如下:1.空白对照组10 ul完全细胞培养液,6h时再次加入完全细胞培养液10 μl,培养至12 h时收集细胞上清液;2.LPS组:每孔加入50μg/ml的LPS试剂10 μl,培养至6h时向各孔中加入完全细胞培养液10 μl,培养至12 h时收集细胞上清液;3.LMWH组:每孔加入完全细胞培养液10 μl,培养至6 h时向各孔中加入5 AXaIU/ml的LMWH试剂10μl,培养至12h时收集细胞上清液;4.LPS+LMWH组:向每孔细胞悬液中加入50 μg/ml的LPS试剂10 μl,培养至6 h时,向各孔中加入5 AXaIU/ml的LMWH试剂10μl,培养至12 h时取上清液。CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验法观察各组细胞损伤程度,采用ELISA法检测各组间细胞上清培养液中IL-6、TNF-α的表达情况,采用实时荧光定量PCR检测细胞内LncRNA-H19相对表达。结果:1各组两两比较,细胞上清液中TNF-α表达浓度在LPS组、LPS+LMWH组都显著较对照组高;LMWH组与空白对照组细胞上清培养液中TNF-α浓度对比相对较低（P＜0.05）;LMWH组细胞上清培养液中IL-6数值显著低于LPS+LMWH（P＜0.05）;LPS+LMWH组与LPS组细胞上清培养液中TNF-α浓度相比较低（P＜0.05）。2各组两两比较,细胞上清液中IL-6表达浓度在LPS组、LPS+LMWH组均明显比对照组高;LMWH组比对照组细胞上清培养液中IL-6浓度略低（P＜0.05）;LMWH组细胞上清培养液中IL-6浓度显著较LPS+LMWH组降低（P＜0.05）;LPS+LMWH组对比LPS组细胞上清培养液中IL-6浓度偏低（P＜0.05）。3较对照组细胞活力比,LPS组细胞活力低,LPS+LMWH组较LPS组细胞活性力高（P＜0.05）。4各组两两比较,LPS组较对照LncRNA-H19表达含量高（P＜0.05）,LPS+LMWH组较LPS组细胞LncRNA-H19表达含量下降（P＜0.05）。结论:低分子肝素可能通过抑制LncRNA-H19表达,抑制TNF-α和IL-6释放,减轻A549细胞内毒素刺激后的炎症反应。
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