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本学位论文选用美洲蟑螂头部作为实验酶源材料,首先采用正交实验对美洲蟑螂头部AChE的酶活测定条件进行了优化,其次采用盐酸普鲁卡因胺亲和层析法对蟑螂头部AChE粗酶进行了分离纯化,最后测定了其纯化酶对16种农药的敏感性,并与电鳗AChE、粗酶进行了比较,为科学评估其是否可作为敏感酶源提供实验依据。主要研究成果如下:1、美洲蟑螂AChE的酶活测定条件的优化美洲蟑螂AChE的基础酶活较高,且其酶活测定最佳反应体系条件为:底物浓度1.0mmol/L、酶冻干粉质量浓度0.05g/mL、温度35℃、时间10min、pH7.5,且这三种因素对实验结果的影响程度从大到小是:pH值、反应温度、反应时间。2、美洲蟑螂头部AChE的分离纯化及特性研究采用盐酸普鲁卡因胺亲和层析法对美洲蟑螂头部AChE粗酶进行了分离纯化,纯化倍数为172.04倍,产率为16.18%;纯化酶经过SDS-PAGE电泳,其相对分子量约为78kDa,与其它文献报道相近;蟑螂AChE的Km值为0.0402mmol/L,电鳗AChE的Km值为0.0784mmol/L,两者对底物ATChI的亲和力接近。3、美洲蟑螂头部AChE对常用农药的敏感性研究(1)两种AChE对五种有机磷农药(包括:敌百虫、敌敌畏、久效磷、速灭磷、氧化乐果)的IC50无明显差异,其中对四种农药的敏感性基本保持在同一个数量级,只有速灭磷有差异明显,蟑螂AChE对速灭磷敏感性要高于电鳗,IC50值分别为9.1×10-8mol/L和2.28×10-7mol/L;对蟑螂AChE和电鳗AChE两种纯酶而言,敏感性最强的速灭磷与敏感性最弱的氧化乐果IC50之间分别相差700、180倍,范围跨度较大。(2)两种AChE对七种氨基甲酸酯类农药(包括:速灭威、甲萘威、灭多威、涕灭威、克百威、丙硫克百威、丁硫克百威)的敏感性无显著差异,IC50值均保持在10-6M数量级,但对异丙威的敏感性却相差一个数量级,蟑螂AChE、电鳗AChE对异丙威的IC50值分别为6.4×10-8、8.6×10-7M;对蟑螂AChE和电鳗AChE两种纯酶而言,敏感性最强与敏感性最弱IC50之间分别相差41、33倍。(3)两种AChE对16种有机磷和氨基甲酸酯类农药的敏感程度较为一致;对氨基甲酸酯类农药的敏感性要高于有机磷农药;对有机磷农药敏感性跨度范围要大于氨基甲酸酯类农药。(4)美洲蟑螂AChE纯化后敏感性略有提高,对敌敌畏、敌百虫、克百威的敏感性分别提高3、6、3倍,而对甲萘威、速灭威的敏感性无改善。(5)美洲蟑螂AChE对部分农药的敏感性要高于电鳗AChE,可将其作为酶抑制法替代酶源进行深入研究。