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本文主要分两部分展开研究： 第一部分：肥大型软骨细胞特异的小鼠十型胶原蛋白基因增强子候选转录结合因子的TRAP筛选与鉴定 研究背景: 十型胶原蛋白基因（COL10A1）在肥大型软骨细胞中特异表达。人类COL10A1基因突变或异常表达常伴有软骨细胞成熟受损并见于多种骨骼疾病。本实验室此前的研究表明，Runx2与小鼠Col10a1基因增强子直接结合，是介导其特异表达的必需转录因子。研究还表明需要有多种因子参与共同调节Col10a1基因的表达。 研究目的: 通过检测TRAP预测的Col10a1基因增强子候选转录结合因子在多种小鼠软骨细胞模型中的表达，探讨这些候选因子（尤其是转录因子Tbx5）与Col10a1基因表达的相关性以及其调节软骨细胞分化成熟的潜在功能。 研究方法: (1)运用启动子序列分析软件TRAP（Transcription factor affinity prediction）预测与已知的150-bp Col10a1基因增强子结合的候选转录因子。网址:http://trap.molgen.mpg.de/cgi-bin/trap_form.cgi。 (2)应用荧光定量PCR、免疫组化和Western blot技术检测TRAP预测的候选转录因子在小鼠MCT、ATDC5和原代软骨细胞中的表达。这些软骨细胞根据培养条件或显微切割区域的不同分为增殖型和肥大型软骨细胞。肥大型软骨细胞中Col10a1基因的表达明显升高。 (3)应用基因转染和RNA干预技术，在增殖型MCT细胞中过表达或干扰Col10a1基因候选转录调节因子Tbx5的表达，以研究其对Col10a1基因的调控作用。 研究结果: (1)TRAP预测的结果显示，按亲合力大小，150-bp Col10a1基因增强子共有48个潜在的转录因子结合位点，其统计学P值小于0.05。去除重复的位点，约有32个候选转录因子可能和该增强子结合参与Col10a1基因的调控。 (2)基因表达分析的结果表明:和增殖型MCT细胞比较，有12个候选因子(Hoxa3、Lsx、Evx2、Dlx5、S8、Pa2、Egr2、Mef2a、Barhl2、Gklf、Sox17和Crx)在Col10a1基因显著高表达的肥大型MCT细胞中也显著高表达，另有4个候选因子(Lhx4、Tbx5、Mef2c和Hb9)则显著降低。同时，在ATDC5和小鼠原代软骨细胞中检测上述差异表达的16个候选因子，分别仅4个(Lhx4、Mef2c、S8、Pax2)和2个候选基因(Lhx4和Mef2c)的表达与MCT细胞的检测结果有差异。检测部分候选基因如Tbx5、Dlx5、Klf4、Sox17、Egr2等在MCT细胞中的蛋白水平，其结果与细胞中mRNA的表达水平一致。Tbx5在各种肥大型软骨细胞的表达显著降低。 (3)我们在增殖型MCT细胞中过表达Tbx5，结果导致肥大型MCT细胞Col10a1的mRNA水平显著降低，而瞬时干扰Tbx5则显著提高Col10a1的表达。 研究结论: TRAP预测有多种候选转录因子，如Cacd、Gklf、Gli、Me f2和Tbx5等，与小鼠150bp Col10a1基因增强子结合。其结合位点与已知的Col10α1基因转录调节因子Runx2的结合位点比邻或重叠，提示存在协同调节Col10a1表达的机制。表达分析与初始功能研究提示Tbx5与多种软骨细胞模型中Col10a1基因的表达呈负相关，是其潜在的转录抑制因子。进一步研究Col10a1基因候选调节因子的功能，有望为相关骨骼疾病找到新的治疗靶点。 第二部分:ETA受体拮抗剂治疗前列腺癌的meta分析 研究背景: Meta分析是对相对独立但又具相同或相近研究目标的多个研究成果的综合和定量分析。它克服了单一研究样本量不足和研究偏倚，对于医学尤其是肿瘤学研究的治疗评估和药效分析具有重要意义。本实验室致力于研究骨发育与骨肿瘤等相关疾病，同时也关注易发骨转移相关肿瘤的研究。前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤，由于易发骨转移及对激素治疗抵抗，其死亡率高居男性的第二位。此前的研究提示内皮素和内皮素受体（ETA和ETB）在前列腺癌的进展中起重要作用，然而，临床上应用内皮素受体拮抗剂治疗前列腺癌的疗效和风险有待进一步评估。 研究目的: 通过meta分析探讨ETA受体拮抗剂治疗前列腺癌（尤其是激素抵抗的难治性前列腺癌）的疗效和风险（如骨痛等骨相关特性等）的评估。 研究方法: Meta分析的数据来自于九篇临床研究，这些研究符合应用选择性抑制内皮素受体A拮抗剂Zibotentan或者Atrasentan治疗前列腺癌的筛选标准。 研究结果: 综合分析的结果表明，与安慰剂相比，Zibotentan治疗前列腺癌并未提高总生存期(OS)(合并风险比(HR)，0.86，95％ CI0.70-1.06)，亦未提高无进展生存时间(PFS)(合并风险比(HR)，0.98，95％ CI0.91-1.06)。同时，Atrasentan治疗前列腺癌其总生存期(OS)(合并风险比(HR)，0.99，95％ CI0.90-1.08)和无进展生存时间(PFS)(合并风险比(HR)，0.94，95％ CI0.86-1.02)也未见提高。然而，与安慰剂相比，Atrasentan治疗前列腺癌降低了前列腺特异抗原(PSA)(合并风险比(HR)，0.87，95％ CI0.78-0.97)，降低了骨痛风险(合并相对风险(RR)，0.68，95％ CI0.48-0.97)。另外，Atrasentan治疗前列腺癌病人显著延迟了前列腺特异抗原和骨碱性磷酸酶的升高(P＜0.05)。 研究结论: Atrasentan治疗前列腺癌病人可减轻其骨痛症状及和肿瘤相关的骨质特性有改善作用。