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食用菌兼具营养、美味、保健三大优点,广受消费者青睐。食用菌产品有干品和鲜品之分,由于运输、销售环节未能全程冷链,常温下外源细菌大量繁殖,导致食用菌鲜品的严重劣变。为此,本文以香菇等多种食用菌鲜品为研究对象,探究外源细菌种类、数量、多样性,分析其在货架期的动态变化。在此基础上,选用金针菇中优势细菌为例,创建快速检测方法。研究结果如下: 1.通过平板培养和16S rDNA高通量测序法,对香菇等九种食用菌鲜品外源细菌种类、数量、多样性进行研究,结果表明:平板培养法中,不同食用菌鲜品表面均可分离到美洲爱文菌(Ewingella americana),为优势细菌,其次是乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)。16S rDNA高通量测序法对物种相对丰度进行分析,表明双孢蘑菇、茶树菇、猴头菇、蟹味菇、平菇等食用菌鲜品外源细菌中假单胞菌属(Pseudomonas)丰度最高,黑木耳、金针菇、香菇、杏鲍菇则分别以鞘氨醇单胞菌属(Sphingomons)、乳球菌属(Lactococcus)、伯克氏菌属(Burkholderia)、欧文氏菌属(Erwinia)丰度最高。多样性分析结果表明,黑木耳、香菇外源细菌物种多样性最高,杏鲍菇外源细菌物种多样性最低;香菇、杏鲍菇、茶树菇外源细菌群落明显区别于其他六种食用菌。 2.对金针菇、蟹味菇以及杏鲍菇货架期1-5天外源细菌进行种类与数量的研究,结果表明:平板培养法中,菌落计数发现三者货架期第5天外源细菌数量均较第1天有显著性增加,分别增长了35倍(蟹味菇)、418倍(金针菇)、4117倍(杏鲍菇);种类鉴定发现金针菇货架期外源细菌优势种为美洲爱文菌和变形肥杆菌(Obesumbacterium proteus);蟹味菇货架期外源细菌优势种为解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)和深红沙雷氏菌(Serratia rubidaea);杏鲍菇货架期外源细菌优势种为美洲爱文菌和北京泛菌(Pantoea beijingensis)。16S rDNA高通量测序法发现金针菇外源细菌物种丰富度低于其他两者;三种菇表面均存在大量的假单胞菌属和乳球菌属,蟹味菇和杏鲍菇假单胞菌居多,随货架期延长丰度增大,金针菇乳球菌属居多,随货架期延长比例降低。两种方法中16S rDNA高通量测序法对物种鉴定更为全面,对外源细菌丰度的变化可进行量化分析。 3.创建乳球菌LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)快速检测方法。以金针菇优势菌乳球菌为研究对象,对其保守序列设计多组引物,结果表明:rpoA289引物组合具有较好的特异性,能够检测到乳球菌基因组DNA最低浓度为0.9 pg/μl,检测乳球菌纯培养物的最低浓度为3.3 CFU/ml。