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有机酸是决定柑橘果实内在品质的重要组分之一,其含量的高低与果实的衰老进程和贮藏性能密切相关。高含量的有机酸有助于果实的保鲜,因此寻找维持高含量有机酸或减缓有机酸降解的方法来延缓柑橘果实衰老和维持果实品质对柑橘采后研究具有重要意义。柠檬酸是柑橘果实中最主要的有机酸,其含量在采后呈波动下降趋势。GABA代谢支路与TCA循环紧密联系,是调控柠檬酸含量的重要途径,参与调控采后柑橘果实有机酸的降解。GABP(线粒体GABA转运蛋白)是联系GABA支路与TCA循环的纽带,可作为调控柑橘果实采后柠檬酸代谢的关键点。寻找GABP上游调控因子,从转录调控水平探索GABP对柑橘果实采后柠檬酸代谢的调控机制,可为开发调控柑橘采后有机酸含量及延缓衰老的技术提供理论依据。本研究通过克隆柑橘GABP基因(CsGABP)并分析其启动子顺式作用元件,利用转录组数据筛选及酵母单杂交技术验证调控CsGABP的候选转录因子,并探讨其调控机制,研究结果如下:1.克隆得到HB柚和无酸柚CsGABP基因组全长及启动子序列,并克隆HB柚、无酸柚、冰糖橙、锦橙、沙田柚五个柑橘品种CsGABP基因ORF区。发现HB柚和无酸柚各存在两条CsGABP基因,分别为CsGABP-a,CsGABP-b和CsGABP-a,CsGABP-c,其中CsGABP-a是共有的一条,gDNA相似度高达99%,启动子序列相似度高达98%,而ORF区在各品种间相对保守且只有一条CsGABPa,表明可能只有CsGABP-a发生转录。2.分析CsGABP-a基因启动子顺式作用元件,发现其包括光响应元件Gbox,GT1-motif,TCT-motif等,逆境相关的作用元件G-box,W-box,GCC-Box,TGACG-motif等,激素响应有关元件,如G-box和ABRE(ABA),GCC-box(ETH),TGACG-motif和CGTCA-motif(MeJA),GARE-motif(GA),TCA-element(SA),这些作用元件的存在表明CsGABP-a基因的表达可能受光信号、逆境和激素诱导。3.转录组数据分析并筛到与CsGABP基因共表达的23个转录因子基因,通过qRT-PCR进行验证,并对CsGABP基因及挑选转录因子表达趋势进行相关性分析,挑选到与CsGABP基因表达显著相关的5类共9个候选转录因子基因:CsWRKY40,CsWRKY33,CsbHLH,CsERF72,CsZF-B,CsBZIP11,CsABR1,CsBZIP21,CsZF-A2。4.预测候选转录因子bHLH类,WRKY类,AP2/EREBP类,bZIP类可能绑定元件分别为G-box,W-box,GCC-box,TGACG-motif。设计并构建CsGABP-a启动子中包含这些元件的8个元件及片段诱饵载体和9个候选转录因子猎物载体,酵母单杂筛选cDNA文库及“点对点”验证发现CsWRKY33、CsABR1分别与WBox、GCC-Box作用元件互作,CsbHLH与QbHLH启动子片段互作,CsZF-B,CsbHLH13与QAP2-bHLH启动子片段互作。QbHLH及QAP2-bHLH启动子片段均包含G-Box作用元件,W-Box,GCC-Box,G-Box与逆境、乙烯、ABA、及光响应相关,说明CsGABP-a基因与CsWRKY33,CsABR1,CsbHLH,CsbHLH13,CsZF-B相互作用,且可能受逆境、乙烯、ABA及光信号诱导。