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作为一种重要的生命现象,落叶果树芽休眠的形成和解除对多年生植物而言至关重要。休眠机理的研究已在多个物种中展开,涉及生理学、细胞学和分子生物学等多个领域。研究发现染色体的重构与休眠有关。作为染色体的重要组成成分,组蛋白H3与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成核小体八聚体核心,对维持染色质的结构和功能有重要作用。本研究于2010-2013年在山东农业大学园艺试验站和设施果树实验室进行,以‘曙光’油桃((Prunus persica var. nectariana cv. Shuguang))为实验材料,从其花芽中克隆到组蛋白H3变体基因,对其进行序列比对、表达特性分析和休眠过程中功能的初步鉴定。主要结果如下:(1)利用实验室构建的休眠期和休眠解除期的抑制差减文库筛选到的部分片段,通过RACE的方法克隆到基因全长,命名为PpH3.3, GenBank登录号为KC907628。其全长cDNA为821bp,编码含有136个氨基酸的蛋白质。序列分析发现含有组蛋白H3典型结构域N-terminal tail和H3fold domain。序列比对发现PpH3.3编码的氨基酸序列与拟南芥、葡萄的H3.3序列相同。cDNA序列和基因组序列比对发现,PpH3.3基因组DNA含有4个内含子,其中1个内含子位于5′UTR和第1个外显子之间。(2)通过hiTAIL-PCR的方法,克隆到目的基因的上游启动子序列,序列全长1547bp。软件分析发现含有大量的光响应元件,如3-AF1binding site, Box4, C-box, G-box,CATT motif, GT1motif, GTGGC motif, TCT motif和SP1。将启动子连接表达载体pCAMBIA1301,转化拟南芥,GUS染色后发现PpH3.3在根、茎、叶和果莢中表达水平较高。(3)通过定量分析的方法研究在自然休眠进程和不同破眠处理后PpH3.3的表达变化。PpH3.3在休眠期的表达量高于休眠诱导期和休眠解除期。高温和单氰胺处理后,虽然PpH3.3表达变化的程度和时间不同,但2种处理呈现相同的变化趋势,即PpH3.3的表达均先升高,后降低,出现短暂高峰。(4)构建正义植物表达载体pROKII-PpH3.3,采用农杆菌介导的方法,转化84k杨树,同时转空载体作为对照。经卡那霉素筛选获得若干再生植株,PCR鉴定发现PpH3.3在转基因杨树84k中得到成功表达。