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研究背景及目的：胰腺癌是一种高度侵袭性的恶度极高的肿瘤，目前胰腺癌的发病率呈逐年增加的趋势。但胰腺癌早期诊断困难，诊断后手术效果不佳，化疗和各种辅助综合治疗措施效果也不尽如人意。近些年来，天然抗肿瘤药物的研究蓬勃开展，中药及其单体成分的抗肿瘤作用日益受到人们的重视。包括三氧化二砷等一批中药抗癌药物已进入临床并在有些癌肿取得了非常好的疗效。水飞蓟宾和盐酸去氢骆驼蓬碱近年来已有较多研究，尤其是水飞蓟宾，许多研究都证明了其对多种肿瘤的生长抑制作用。但目前在对胰腺癌的研究中，水飞蓟宾和盐酸去氢骆驼蓬碱的报道很少。因此，我们应用人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞作为研究对象，探索了两种药物抑制肿瘤细胞生长、诱导其凋亡和自噬并导致细胞周期阻滞的分子机制。以期能够寻找到对胰腺癌具有高抗癌活性，低毒副作用的天然抗肿瘤药物。研究方法：1、用MTT法检测不同浓度的水飞蓟宾在不同时间点对正常肝细胞L02、人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞的增殖抑制作用；Annexin V-PI双染流式细胞术测定细胞凋亡比例；用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-xs、Bax、Mcl-1、Bid、Bim、Caspase-3、Caspase-9、PARP以及SAPK/JNK通路蛋白JNK、phospho-JNK的表达情况。PI单染测定不同浓度水飞蓟宾作用于人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞后细胞周期的变化情况。用Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B1、Cyclin D、Cyclin E2、CDK4、CDK6、P15和P21的表达情况。2、用MTT法测定不同浓度的盐酸去氢骆驼蓬碱在不同的时间点作用于正常肝细胞L02和人胰腺癌AsPC-1细胞后的增殖抑制情况；克隆形成抑制实验观察不同浓度的盐酸去氢骆驼蓬碱对AsPC-1细胞克隆株形成的影响；Annexin V-PI双染流式细胞术测定细胞凋亡比例；用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP以及自噬相关蛋白P62、LC3的表达情况。研究结果：1、水飞蓟宾通过线粒体凋亡途径诱导人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞凋亡，并激活JNK，并导致人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞周期阻滞于G1期水飞蓟宾处理对正常肝细胞L02影响不大，并出现轻度促增殖作用，但可以使AsPC-1和SW1990细胞增殖抑制，在药物剂量较小和作用时间较短的情况下，出现轻度的促增殖作用，随着药物浓度的增高和作用时间的增加，增殖抑制率显著增加，与对照组相比具有统计意义（P<0.05）。水飞蓟宾作用于AsPC-1和SW1990细胞在48和72h的IC50分别为224.20、87.25μmol/L和218.41、86.91μmol/L。水飞蓟宾处理AsPC-1和SW1990细胞48h后，Annexin V-PI双染实验显示，当药物浓度达到200μmol/L细胞出现明显的早期凋亡细胞群和晚期凋亡细胞群。Western blot检测蛋白表达情况发现，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1表达明显减少，促凋亡蛋白Bcl-xs、Bax、Bid、Bim表达增加，PARP被切割活化，Caspase-3、Caspase-9前体表达减少，提示了凋亡的发生；同时phospho-JNK表达增加，提示JNK通路活化。不同浓度的水飞蓟宾处理AsPC-1和SW1990细胞后，PI单染实验发现，G1期细胞比例明显增加，提示细胞被阻滞于G1期。Western blot检测蛋白表达情况发现，与G1晚期、S期、G2期相关的细胞周期蛋白Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1的表达均减少，G1期相关的细胞周期蛋白Cyclin D和细胞周期蛋白激酶CDK6的表达亦明显减少，而G1期相关的负性调节蛋白P15和P21的表达则明显增加，与流式细胞术检测的结果相一致。2、盐酸去氢骆驼蓬碱可以诱导人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞发生凋亡和自噬盐酸去氢骆驼蓬碱作用人胰腺癌AsPC-1细胞后，不同浓度的药物对其生长均有抑制作用，且呈剂量-效应关系（P﹤0.05），24h，48h及72h的IC50分别约为116.5、66.0、22.3μmol/L，但对正常肝细胞L02抑制率不大；与对照组相比随着盐酸去氢骆驼蓬碱浓度的增加，细胞克隆逐渐减少；不同浓度盐酸去氢骆驼蓬碱作用后，均出现明显的晚期凋亡及坏死细胞群，且呈剂量-效应关系；盐酸去氢骆驼蓬碱作用后，胰腺癌AsPC-1细胞出现Caspase-3、PARP酶切活化，同时自噬标记性蛋白LC3Ⅱ表达增加，P62表达减少。结论：1、水飞蓟宾通过线粒体途径诱导人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞凋亡，激活了JNK通路，并导致人胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞周期阻滞于G1期。2、盐酸去氢骆驼蓬碱以通过诱导细胞凋亡及自噬的方式抑制人胰腺癌AsPC-1细胞的生长。