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目的本研究首先在人胃癌AGS细胞中分选出CD44(+)CD24(-)细胞，从细胞增殖、肿瘤球形成、迁移侵袭方面观察该细胞生长的特点，初步探讨干细胞维持特殊生物学特性的机制；基因芯片方法分析CD44(+)CD24(-)AGS细胞和未分选的AGS细胞的基因表达差异，初步筛选出与AGS细胞系肿瘤干细胞相关的基因。方法采用免疫磁珠分选技术(magnetic cell sorting,MACS)从AGS细胞中分选出CD44(+)CD24(-)AGS细胞亚群，流式细胞术检测分选效率；肿瘤球形成实验观察CD44(+)CD24(-)AGS细胞增殖能力；迁移和侵袭实验分析CD44(+)CD24(-)AGS细胞迁移和侵袭能力；采用罗氏NimbleGen人类基因组表达谱芯片检测技术分析CD44(+)CD24(-)AGS细胞与未分选AGS细胞的基因表达谱差异；分析发现干细胞相关基因CTNNB1（β-catenin）和TACSTD1（EpCAM），分别用RT-PCR和Western Blot进行验证。结果1. FCM分析结果显示，在AGS细胞系中CD44(+)AGS细胞约占5.15%，而CD24(+)AGS细胞仅占0.88%。使用MACS技术分选后，得到CD44(+)CD24(-)AGS细胞，其中CD44阳性率为99.83%，CD24阴性率为99.9%；2.肿瘤球形成实验显示，CD44(+)CD24(-)AGS细胞生长于无血清培养基（serum-free medium,SFM）中，2周见肿瘤球形成，其形成率为76.5%，而未分选AGS细胞在相同培养条件下不形成肿瘤球；3.迁移侵袭实验发现，24小时后迁移及侵袭至微孔膜下层的CD44(+)CD24(-)AGS细胞均较未分选AGS细胞多，证明其迁移、侵袭能力强于未分选的AGS细胞；4.从CD44(+)CD24(-)和未分选AGS细胞中提取DNA进行基因芯片分析，结果共筛选出347个差异表达基因，其中上调基因199个，下调基因148个，其中找到了两个干细胞相关的差异表达基因β-catenin、EpCAM；5. RT-PCR显示，与未分选AGS细胞比较，β-catenin、EpCAM mRNA表达在CD44(+)CD24(-)AGS细胞中明显上调（P<0.001）；Western blot同样显示β-catenin、EpCAM蛋白在CD44(+)CD24(-)AGS细胞中表达水平明显增加（P<0.001）。结论1. CD44(+)CD24(-)AGS细胞具有胃癌干细胞样生物学特性。2.基因芯片技术筛选了CD44(+)CD24(-)AGS细胞与未分选的AGS细胞的差异表达基因，共筛选出347个差异表达基因，其中我们分析得到了β-catenin和EpCAM。3.为推断干细胞相关基因β-catenin、EpCAM为胃癌干细胞标志物提供了理论依据。