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目的:本研究旨在通过检测miR-381-3p在85例肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织中的表达水平,明确miR-381-3p在肝癌中的异常表达情况。通过分别转染 miR-3 81-3p mimic 和 mimic NC、miR-3 81-3p inhibitor 和 inhibitor NC到SMMC-7721肝癌细胞中,研究高表达miR-381-3p和低表达miR-381-3p对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移能力以及细胞周期和凋亡等重要生物学功能的影响,探索miR-381-3p在肝癌中的作用,为治疗肝癌寻找新的生物学靶点提供依据。通过对miR-381-3p靶基因的预测和功能分析,探究miR-381-3p在肝癌中的可能作用机制,为进一步的验证提供理论依据。方法:1.收集2013年4月至2016年9月在广西医科大学附属肿瘤医院病理诊断为肝癌患者的肝癌组织及其相对应的癌旁组织,共85对组织标本,将其分为癌组织组和癌旁组织组。提取肝癌及癌旁组织的总RNA,应用qRT-PCR分别检测癌组织组及癌旁组织组中miR-381-3p的表达水平;2.应用卡方检验的统计学方法分析miR-381-3p表达水平和与85例肝癌患者临床病理特征的相关性;3.体外进行SMMC-7721肝癌细胞的培养,应用基因转染技术,在SMMC-7721 肝癌细胞中分别转染 miR-381-3p mimic 和 mimic NC、miR-381-3p inhibitor 和 inhibitor NC 转染试剂。以转染后 miR-381-3p mimic和miR-381-3p inhibitor的SMMC-7721肝癌细胞为实验组,以转染后mimic NC和inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞为对照组。其中miR-381-3p mimic 使 SMMC-7721 肝癌细胞中的 miR-381-3p 过表达,miR-381-3p inhibitor使SMMC-7721肝癌细胞中的miR-381-3p抑制表达,为下一步实验提供模型支持;4.采用MTT细胞增殖实验,分别检测miR-381-3p过表达和抑制表达后对SMMC-7721肝癌细胞增殖能力的影响情况;5.采用细胞侵袭实验,分别检测miR-381-3p过表达和抑制表达后对SMMC-7721肝癌细胞侵袭能力的影响情况;6.采用划痕修复实验,分别检测miR-381-3p过表达和抑制表达后对SMMC-7721肝癌细胞迁移能力的影响情况;7.采用流式细胞检测技术,分别检测miR-381-3p过表达和抑制表达后对SMMC-7721肝癌细胞周期和凋亡的影响情况;8.利用miRecord数据库对miR-381-3p的靶基因进行预测,DAVID在线分析工具,对其预测得到的miR-381-3p的靶基因集合进行GO富集分析和KEGG生物通路富集分析。结果:1.miR-381-3p在85对肝癌组织及相对应的癌旁组织中的表达分析结果显示:与癌旁组织相比肝癌组织中miR-381-3p的表达水平较低,差异有统计学意义(P=0.017)。2.miR-381-3p的表达水平与肝癌的临床病理特征的分析结果显示:miR-381-3p的表达水平仅与AFP(P=0.012)有关联;3.建立转染肝癌细胞的模型:与mimic NC相比,转染了 miR-381-3p mimic的SMMC-7721肝癌细胞中miR-381-3p的表达量明显增加,差异有统计学意义(P=0.003);与转染了 inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞相比较,转染了 miR-381-3p inhibitor 的 SMMC-7721 肝癌细胞中 miR-381-3p的表达量明显减少,差异有统计学意义(P=0.041)。4.增殖实验结果显示:与转染了 mimic NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了 miR-381-3pmimic的SMMC-7721肝癌细胞活性从48小时后明显较低,差异有统计学意义(P=0.000);而与转染了 inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了 miR-381-3p inhibitor的SMMC-7721肝癌细胞活性从48小时后明显较高,差异有统计学意义(P=0.019);5.Transwell细胞侵袭实验结果显示:经过48个小时的侵袭后,与转染了 mimic NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了 miR-381-3p mimic的SMMC-7721肝癌细胞组侵袭入下室膜上的肝癌细胞明显减少,差异有统计学意义(P=0.009);而与转染了 inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了 miR-381-3p inhibitor的SMMC-7721肝癌细胞组侵袭入下室膜上的肝癌细胞明显增多,差异有统计学意义(P=0.000);6.细胞划痕修复实验结果显示:经过48个小时的迁移后,与转染了mimic NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了miR-381-3p mimic的SMMC-7721肝癌细胞愈合速度显著较慢,差异有统计学意义(P=0.007);而与转染了 inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞的对照组相比,转染了 miR-381-3p inhibitor的SMMC-7721肝癌细胞的愈合速度显著较快,差异有统计学意义(P=0.035);7.流式细胞检测技术分析细胞周期和细胞凋亡结果显示:转染了miR-381-3p mimic 和 miR-381-3p inhibitor 的 SMMC-7721 肝癌细胞与相应的阴性对照组相比,实验组的各细胞周期细胞所占比和细胞凋亡率均无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);8.miR-381-3p的靶基因预测及其功能分析结果显示:4种及4种以上数据库可以预测到的靶基因共有935个,其中,LRRC4已经有实验数据支持是miR-381-3p的确切靶基因;GO富集分析结果显示:miR-381-3p靶基因多起结合作用,参与RNA聚合酶II启动子转录的调节、信号转导、转录的调节等生物过程;KEGG的生物通路富集分析结果显示:miR-381-3p靶基因参与Rap1信号通路、癌症的信号通路、细胞通讯的黏着斑等相关通路。结论:miR-381-3p在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁组织,在肝癌的发生发展中可能是抑癌基因,可以通过对靶基因的调节作用抑制肝癌细胞的增殖,侵袭和迁移。有望成为肝癌新的肿瘤标志物和治疗靶点,为后续的分子研究机制提供理论基础。