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摘要：禽呼肠孤病毒(ARV)是家禽重要疾病之一,主要感染鸡和火鸡,常与其他疾病混合感染,并引起免疫抑制。虽然ARV感染已被证实可诱导宿主细胞凋亡,但ARV与其靶细胞之间的相互作用关系,需进一步研究。为了探讨ARV分离株GX/2010/1感染细胞后对自噬的影响,我们首先用表达GFP-LC3融合蛋白的重组质粒分别转染非洲绿猴肾细胞(Vero)和鸡胚成纤维细胞(CEF),然后再感染ARV分离株GX/2010/1,利用荧光显微镜观察GFP-LC3在细胞内形成的聚点。结果显示,ARV感染组和雷帕霉素处理组发生聚点的细胞显著多于对照组。进一步采用透射电子显微镜对ARV感染的Vero细胞中形成的自噬泡进行观察。结果显示,经ARV感染的Vero细胞中可观察到许多典型自噬结构,比如杯状体、肿胀的线粒体、自噬体双层膜结构等。因为LC3Ⅱ表达量通常作为自噬发生水平的标志,我们通过免疫印迹的方法检测ARV分离株GX/2010/1感染Vero细胞和CEF细胞中LC3-Ⅱ/β-Actin比值的变化,发现ARV感染组和雷帕霉素处理组LC3-Ⅱ/β-Actin比值均显著升高,并在病毒感染早期促进自噬,在病毒感染晚期则抑制自噬。进一步检测p-mTOR/β-Actin和p-Akt/β-Actin的比值,结果表明Ⅰ型PI3K/Akt/mTOR信号通路依赖于自噬发生。为了探讨宿主细胞自噬对ARV分离株GX/2010/1复制的影响,我们对药物诱导和抑制Vero细胞和CEF细胞自噬的条件进行优化,结果显示100nM雷帕霉素和50μM的氯喹可分别显著诱导和抑制宿主细胞自噬。采用以上浓度预处理Vero和CEF细胞,然后感染病毒,TCID50法测定细胞培养液上清中子代病毒的滴度,发现自噬诱导剂雷帕霉素可提高ARV分离株GX/2010/1感染宿主细胞的病毒复制水平,而自噬抑制剂氯喹则通过抑制自噬溶酶体的形成,致使病毒滴度降低。表明细胞自噬对ARV复制具有促进作用。总之,本研究证实了自噬决定ARV分离株GX/2010/1感染细胞的病毒产量,有助于深入探讨ARV与宿主细胞相互作用,也为ARV的防治策略提供新思路。