目的探讨及推广荧光定量PCR技术在脊柱结核诊断中的应用方法选择结核分枝杆菌16Sr DNA和CFP10两个基因作为本次实验的靶基因,分别设计两对特异性的引物,应用SYBR Green I法(荧光染料法)建立荧光定量PCR反应体系,依据基因数据库中所提供的两种基因的保守序列,利用人工化学合成法获得目的基因,构建重组质粒体p GH-16Sr DNA和p GH-CFP10,并对重组质粒体进行酶切鉴定和序列测定,成功构建阳性标准品,并制作出标准曲线及曲线方程,最后用此方法对20例临床确诊为脊柱结核患者的血浆标本以及20例非脊柱结核患者的血浆标本进行检测与定量。结果本次实验中所建立的荧光定量方法线性关系好,均呈线性负相关。两个基因(16Sr DNA和CFP10)的标准曲线的相关系数分别达到0.999和0.998,实验中最低检测下限分别达到1.48×101copies/ul和2.67×101copies/ul,而且特异性好,两条基因的溶解曲线均呈现单一的峰值,没有出现非特异性扩增产物以及引物二聚体的干扰。在临床上已确诊的20例脊柱结核患者的血浆MTB-DNA的检测结果提示二者全部为阳性,20例非脊柱结核感染患者的血浆MTB-DNA检测结果有19为阴性,1例提示为阳性,并且平均检测一份临床血浆标本的时间仅为2小时。结论本实验成功建立了以16Sr DNA和CFP10为靶基因的脊柱结核荧光定量PCR检测体系,可以初步用于临床脊柱结核患者的结核分枝杆菌病原体检测及定量。