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根据已发表资料,设计了一对引物,应用PCR方法扩增出鸡传染性法氏囊病毒VP2基因,将PCR产物克隆到pGEM-T easy载体,经限制性酶切分析和测序证实扩增到的VP2基因序列完全正确。用EcoRI和XbaI将该基因片段从pGEM-T easy载体切下,回收目的DNA片段并与杆状病毒转座载体pFastBacl连接,筛选出重组转座载体pFastBacl-VP2,转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP2;将重组质粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得了含有IBDV-JS株VP2基因的重组杆状病毒rBacmid-VP2(rVP2)。重组病毒感染Sf9细胞后,用IFA和Westem blot方法对细胞表达产物进行检测,结果表明:构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达IBDV-JS株的VP2蛋白。 将传染性法氏囊(IBDV-JS株)病毒研磨液经适当处理后加佐剂免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。用固定的感染了rBacmid-VP2的昆虫细胞通过间接免疫荧光试验(IFA)检测细胞培养上清,结果筛选出3株分泌抗IBDV VP2蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为185、2H11和5D1。经2次亚克隆后,100%杂交瘤细胞保持了分泌抗体的能力。效价测定结果表明,单抗腹水IFA效价可达1:64000,ELISA效价达1:80000;细胞上清IFA效价达1:160,ELISA效价达1:160。间接免疫荧光试验进一步证明,所有这三株单克隆抗体均能与IBDV感染的CEFs和rVP2感染的Sf9细胞反应,而不能与MDV、REV感染的CEFs等反应,证明3株单抗均是针对IBDV VP2蛋白的特异性单克隆抗体。应用捕获ELISA方法进行的亚类鉴定结果表明:单抗IB5为IgG2b亚型,单抗2H11和5D1的抗体亚型为IgGl。此三株单抗将可以广泛用于体外表达系统(如腺病毒载体、疱疹病毒载体等)表达VP2基因的鉴定和功能的深入研究。