背景人脐带间充质干细胞（umbilicalcordmesenchymalstemcells,UC-MSCs）应用广泛，已深入到临床试验阶段。在用UC-MSCs进行移植治疗时会遇到很多问题，据文献报道和我们先前的实验研究发现，UC-MSCs经实验室培养扩增到临床输注环节众多，如分离培养前的组织采集、培养过程、移植前保存、运输等，这些环节都会对移植前细胞的质量产生不同程度的影响，而其中影响最直接和关键的是保存条件，特别是移植前细胞在移植媒介中存放的时间长短。在实际操作中并不能将新鲜分离的干细胞即刻输注入体内，如出现运输、手术等待等因素时均需将细胞在美国食品和药物管理局（FoodandDrugAdministration，FDA）批准的保存介质中保存一定时间，目前临床移植常用的保存液生理盐水可使UC-MSCs活性下降，影响移植效果，但关于其活性下降原因的报道目前还很少。寻找致使临床移植保存液中UC-MSCs活性下降的原因，可针对性的为临床常用移植保存液的优化提供理论依据，也为UC-MSCs的最适移植保存介质的研究提供基础。目的1.建立稳定的脐带间充质干细胞培养体系，为后续实验的开展提供可靠的、稳定的细胞来源；2.探索氧化应激是否为UC-MSCs临床移植保存过程中活性下降的因素；并在保存液中添加自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）后是否可提高保存效果而且不影响UC-MSCs的特性。方法1.根据脐带的结构和组成成分，选择胰蛋白酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、透明质酸酶和DNAase五酶联合（以下简称五酶法）消化脐带组织分离培养UC-MSCs的方法来分离培养干细胞，对所获得的细胞按照现行国际认可的标准进行鉴定：①形态特征观察；②细胞表面标记；③多向分化潜能鉴定。2.室温（24℃）下用生理盐水保存UC-MSCs，0h、2h、4h、6h后分别检测细胞内活性氧水平、细胞裂解液中丙二醛含量以及三种常见抗氧化酶活性；在保存液中添加不同浓度的NAC，通过CCK-8法判断NAC的最适添加浓度。在保存液中添加最适NAC浓度后，通过检测细胞贴壁率变化来判断NAC对UC-MSCs活性的影响，从而判断NAC对细胞活性的改善情况。最后通过流式细胞术和诱导分化来鉴定NAC是否会影响干细胞特性。结果1.用五酶分离培养UC-MSCs的方法所获得的细胞符合MSCs鉴定标准；2.经生理盐水保存后UC-MSCs内活性氧水平升高；细胞裂解液丙二醛含量升高。抗氧化酶类：超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性均降低。添加NAC的移植保存液组较之不添加组保存UC-MSCs后细胞活性氧水平显著降低、贴壁率升高。保存液中添加NAC后，经保存的UC-MSCs经流式细胞术检测其表面标志分子符合干细胞特性，可诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论1.五酶联合消化法所获得的细胞符合MSCs鉴定标准，可为后续体内外实验提供稳定可靠的细胞来源；2.在临床常用移植保存液中UC-MSCs内活性氧升高是其活性下降的一个因素，在保存液中添加自由基清除剂NAC后能够一定程度的改善保存效果而不影响UC-MSCs的特性。