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本文主要围绕柴胡有效部位——柴胡总皂苷,柴胡挥发油展开研究。制备了柴胡总皂苷含量超过50%的提取物,建立了柴胡皂苷鉴别方法以及含量测定方法;利用水蒸气蒸馏法制备了柴胡挥发油芳香水。然后从柴胡的功效入手,选择中医临床解肌退热的经典药对——“柴胡葛根”作为研究对象,从体内外化学成分、退热作用等方面探讨柴胡葛根有效部位配伍的影响。
按照2010版药典测定了柴胡药材中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。参考文献采用醇提-D101大孔树脂纯化法,并对其进行优化,制备了纯度大于50%的柴胡总皂苷提取物。对柴胡皂苷提取工艺中提取溶剂,料液比,提取时间,提取次数,提取PH进行了单因素考察,而且对其中的提取溶剂,料液比,提取时间三因素进行了正交考察,最后确定提取工艺为10倍量的70%乙醇溶液回流提取3h,提取两次为最佳工艺。对柴胡皂苷的大孔树脂纯化工艺中吸附方式,吸附液PH值,梯度醇浓度进行了优化,最后确定加水稀释至原药材4倍量,上已处理好的D101大孔树脂柱.静态吸附2h,流出液再次吸附。先以水冲洗至流出液无醇味,再以两个柱体积的50%乙醇洗脱除杂,后用四个柱体积的90%乙醇洗脱。通过查阅相关文献,对水蒸气蒸馏从柴胡中提取柴胡挥发油的方法进行优化,对柴胡挥发油提取中的料液比、提取溶剂、提取时间进行正交考察,最后确定加6倍量的10%NaCl溶液提取8h为最佳工艺,正交实验重复性良好。
本文对柴胡皂苷提取物进行了初步的性状检查、薄层鉴别等,并分别建立了柴胡总皂苷,柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的测定方法。高效液相色谱法测定柴胡皂苷a的色谱条件为:十八烷基硅烷键合硅胶柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(38:62),流速为1.0ml/min,检测波长为210nm,柱温25℃,精密度、重复性、稳定性、平均加样回收率均符合要求。三批提取物的含量分别为17.24%、17.68%、17.62%;高效液相色谱法测定柴胡皂苷d的色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈:水(44:56),流速为1.0m1/min,检测波长为204nm,柱温25℃,线性关系、精密度、重复性、稳定性、平均加样回收率均符合要求。三批提取物的含量分别为7.25%、7.18%、7.64%;紫外可见分光光度法测定柴胡总皂苷的检测波长为545nm,加热时间为5min,线性、精密度、重复性、稳定性、平均加样回收率均符合要求。三批提取物柴胡总皂苷含量分别为58.23%、58.62%、58.38%.
采用HPLC法测定葛根配伍柴胡药材合煎分煎,以及柴胡皂苷配伍葛根有效部位前后柴胡皂苷a、d含量的方法,来了解葛根配伍柴胡以及柴胡皂苷配伍葛根有效部位是否会对柴胡以及柴胡皂苷造成影响。结果表明,葛根配伍柴胡药材合煎,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量均增加,可见葛根增加了柴胡的煎煮过程中柴胡皂苷的溶出。葛根黄酮,柴胡挥发油配伍柴胡皂苷提取物后柴胡皂苷a,d的含量与没有配伍的柴胡皂苷提取物中柴胡皂苷a、d的含量无显著性差异,表明柴胡葛根有效部位配伍对柴胡皂苷的含量没有影响。
本课题建立了大鼠内毒素发热模型,对柴胡葛根合煎分煎退热差别、柴胡葛根有效部位退热特点、以及柴胡葛根有效部位配伍退热效果比较进行了考察。结果发现柴胡葛根合煎的解热效果明显优于单煎液;柴胡葛根中柴胡皂苷,柴胡挥发油,葛根黄酮均具有一定的解热效果,但是特点各不相同,柴胡皂苷解热时间持续较长,而葛根和挥发油解热的时间较短,挥发油在长时间后还具有升温作用:柴胡葛根有效部位配伍的解热实验中,柴胡皂苷和葛根黄酮配伍以及柴胡皂苷与葛根黄酮,柴胡挥发油配伍的解热效果最佳。