南通嗜铜菌X1对有机磷农药的降解特性

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zou_zm
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实验室保存有一株可高效降解有机磷农药毒死蜱的细菌菌株,经菌种鉴定确定为新种,命名为Cupriavidus nantongensis X1,南通嗜通菌X1。本文测定了该菌株对9种供试有机磷农药的降解特性并对三唑磷、对硫磷及水胺硫磷的初步代谢产物和代谢路径进行了推测;以化学转化方法对其进行了荧光基因标记,并测定标记菌株的遗传稳定性,以期研究标记菌株在石英砂填装的模拟柱中的迁移动态;提取接种于土壤中的南通嗜铜菌X1菌体RNA,确定了能提取RNA的最低接菌量,以尝试测定基因实时表达量,追踪菌株在石英砂环境中的实际降解活性。结果显示,南通嗜铜菌X1对供试的9种有机磷农药均有降解效果,其中对硫磷、三唑磷及水胺硫磷在24h内的降解率达到了100%,丙溴磷的降解率达到60%以上,倍硫磷、马拉硫磷及硫线磷的降解率在45%左右,杀扑磷和乐果的降解率较低,在20%左右;推测出三唑磷、对硫磷及水胺硫磷的初步代谢产物和代谢路径。检测质粒遗传稳定性,显示外源导入的带有luxAB基因的质粒遗传稳定,研究南通嗜铜菌X1的土壤环境行为,对其进行luxAB基因标记以辅助研究是可行的;从荧光遗传稳定性实验中每次转接涂布的平板上挑取单菌落,分别测定10次转接的菌株对200 mg·L-1毒死蜱12h的降解效果,结果显示,在10代的传代过程中,标记菌株的降解效能未发生明显的衰退,12h对200mg·kg-1毒死蜱的降解率均维持在50%左右。成功提取接种到灭菌土壤中的菌株的总RNA,确定在目前的实验条件下,提取构建表达量所需的RNA,至少需要接种105cfu·g-1的菌量才可提取到结构完整无降解的菌体RNA。
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