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将焦化厂污染土壤样品,在以芘、荧蒽作为底物的矿物盐(MSM)培养基中富集驯化,得到两个能够降解高分子量多环芳烃的混合菌群(芘驯化菌群P,荧蒽驯化菌群F)。通过培养和非培养方法进行了菌群多样性调查。通过构建16S rRNA基因文库的方法,分析焦化厂原始土壤中菌群组成和混合菌群转接3次(P-3,F-3)、6次(P-6,F-6)和9次(P-9,F-9)后的组成变化。系统进化分析表明(1)变形菌纲是土壤原样及P-3,F-3混合菌群中的主要类群,分别占100%,83%和71%;(2)与原土壤样品相似,P-3中γ-Proteobacteria(占变形菌门的77%)中假单胞菌属的菌依然占主导地位,但由于菌群的多样性增加,假单胞菌属所占比例减少。传代过程中,菌群组成发生改变,随着传代次数的增加,菌群的多样性进一步增加,γ-Proteobacteria的比例在混合菌群中的比例下降(P-6中占变形菌门的33%,P-9中占变形菌门的18%),而β-Proteobacteria在混合菌群中的比例上升(P-6中占变形菌门的36%,P-9中占变形菌门的55%);F菌群中β-Proteobacteria的比例也逐渐上升(F-3,30%;F-6,63%;F-9,76%),而α-Proteobacteria和γ-Proteobacteria的组成比例逐渐下降(F-3,41%,27%;F-6,20%,15%;F-9,13%,10%。)。
本文通过培养,从混合菌群中分离纯化得到17株菌,系统进化分析表明分别属于Achromobacter,Bacillus,Microbacterium,Arthrobacter,Exiguobacterium,Alcaligenes和Parapedobacter属。利用分光光度计和高效液相色谱测定混合菌群的生长与降解率,结果表明两个混合菌群可以利用芘或荧蒽作为唯一碳源和能源生长,12 d对芘和荧蒽的降解率分别达到89%和93%。两个菌群的降解活性经过多次转接和冷冻干燥保藏后保持稳定。通过多相分类的方法对焦化厂污染土壤中分离的一株细菌的分类学地位进行研究,结果表明,这株菌属于Parapedobacter属的新种,命名为Parapedobacterterreus sp.nov。