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目的：糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是一种威胁糖尿病(diabetes mellitus, DM)患者生命的并发症,在许多国家DN已成为导致终末期肾功能衰竭的首要原因。DN病程进展具有从高滤过状态到微量白蛋白尿到大量白蛋白尿再到肾功能衰竭的顺序进行的特点,在此过程中伴随多种机制的参与,包括多元醇、PKC途径的激活、蛋白非酶糖基化、大分子终末产物的合成和细胞因子等。DN虽然未被认为是炎症性疾病,但是越来越多的证据表明炎症细胞因子参与了它的发病机制。然而目前为止,仅有转化生长因子-β (transforming growth factor-P, TGF-β),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)等少数细胞因子被确认为在此炎症反应中具有关键作用。CTGF是介导TGF-β致纤维化作用的下游因子,并参与调节细胞外基质的积聚。它在DN肾小球硬化和肾小管间质损伤的发展中起到重要作用。中期因子midkine (MK)是一种肝素结合细胞因子,参与神经元的生存和分化,肿瘤疾病的发展以及一些炎症相关性疾病。最近研究证明MK在DN的发病机制中也起到至关重要的作用。我们发现MK基因敲除(mdk-/-)的小鼠与有MK基因的小鼠相比,能显著延缓DN的发生。然而在DN中MK与其它细胞因子是否相关尚无报道。本研究通过MK反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleortides, AS-ODNs)技术对早期DN进行干预,观察大鼠肾脏组织MK和CTGF表达水平的变化以及探讨MK AS-ODNs在早期DN中的治疗前景。方法：雄性清洁级8周龄SD大鼠30只,体重200-250g,适应性饲养1周后完全随机法分为正常组、DN组和MK AS-ODNs组各10只。DN组和MKAS-ODNs组均行单侧肾脏切除术,高糖高脂饲料饲养4周,随后尾静脉注射STZ30mg/kg;正常组行切皮假手术,普通饲料饲养4周,尾静脉注射柠檬酸缓冲液30mg/kg。注射STZ1周采用葡萄糖氧化酶法连续监测3天随机血糖均≥16.7mmol/L作为DM造模成功的标准。分别于DM成模后第0、3、6周监测饮水量,尿量,体重及24h尿微量白蛋白的变化,成模第6周,MK AS-ODNs组尾静脉注射MK AS-ODNs1mg/kg,正常组和DN组予等量生理盐水尾静脉注射,干预4天后留取24h尿,处死后快速取出肾脏称重,部分肾脏浸于福尔马林溶液中用于病理、免疫组化,部分液氮速冷后-80℃保存用于RT-PCR。结果：1、糖尿病造模成功后DN组和MK AS-ODNs组大鼠逐渐出现多饮、多尿、多食、体重下降,毛发枯黄,无光泽,行动迟缓等症状。成模第6周DN组和MK AS-ODNs组大鼠开始出现24h尿微量白蛋白升高且与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。肾脏大体形态显示：体积增大,重量增加,髓质部分空虚,且肾重体重比值较正常组明显增加(P<0.05)。肾脏组织病理学改变明显,2型早期糖尿病肾病模型制备成功。2、免疫组织化学和实时荧光定量PCR结果均显示：正常组大鼠肾脏组织MK和CTGF的表达水平极低,DN组大鼠肾脏组织中MK和CTGF的表达水平较正常组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);MK AS-ODNs组大鼠肾脏组织中MK和CTGF的表达水平较DN组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。3、MK和CTGF在早期T2DN大鼠肾脏组织中的表达相关性研究表明：在早期T2DN大鼠肾脏组织中MK与CTGF的表达具有直线相关关系,且为正相关(r=0.498,P<0.05)。结论：1、通过单侧肾切除、高糖高脂饮食及小剂量STZ腹腔注射三联法成功制备了早期T2DN模型；2、早期T2DN大鼠肾脏组织中MK和CTGF的表达水平较正常组明显增多；3、AS-ODNs技术对早期T2DN进行干预,可有效抑制MK和CTGF表达水平；4、早期T2DN大鼠肾脏组织中MK与CTGF的表达呈正相关关系。