目的:构建人Bmi-1基因的慢病毒载体,通过转染293T细胞收集病毒液,浓缩病毒液并对该病毒液进行滴度的测定。方法:设计以Bmi-1基因为靶点的短发夹状RNA(sh RNA),将3条Bmi-1基因的sh RNA片段插入至慢病毒载体,对其进行筛选及鉴定。转染具有高转移性的293T细胞,收集病毒液并对病毒液进行浓缩,利用荧光滴度法检测病毒的滴度。结果:构建含有Bmi-1-sh RNA的重组慢病毒载体,经转化大肠杆菌DH5α后提取质粒,与空载体均经Eco RI和Bam HI双酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定。测序结果证实重组的RNA干扰慢病毒载体均有一段与实验设计合成的靶向链相符。测序结果显示重组构建成功。将筛选出的重组慢病毒载体PLVX-sh RNA2-Bmi-1与包装质粒PLP1、PLP2和PLP/VSVG共转染293T细胞,同时设立空载体为对照组。收集的病毒浓缩液经稀释后感染293T细胞,利用荧光滴度法成功检测出病毒滴度。结论:成功构建了Bmi-1基因的sh RNA慢病毒表达载体,通过转染293T细胞后获得了该基因的病毒液并对病毒液进行浓缩,包装成慢病毒颗粒,通过感染目的细胞后用荧光法成功测定出该病毒液的滴度,为探讨下一步Bmi-1基因对鼻咽癌细胞的功能影响奠定了基础。