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柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是世界柑橘产业检疫性病害,亦是最具毁灭性的柑橘病害之一。HLB肆虐于全球的众多柑橘产区,严重制约柑橘产业健康发展。HLB常导致柑橘植株树势衰退、叶片斑驳型黄化、均匀型黄化、缺素型黄化和“红鼻果”病状。HLB病原是一种韧皮部杆菌属中的革兰氏阴性菌,根据16SrDNA基因序列、地理来源及热敏感性,病原细菌可分为韧皮部杆菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas),韧皮部杆菌非洲种(Candidatus Liberibacter africanus,CLaf),韧皮部杆菌美洲种(Candidatus Liberibacter americanus,CLam)三个种。因病原菌尚不能纯培养,至今未完成科赫氏原则验证,所以对该病害的深入研究面临严峻挑战。HLB可通过运输带毒苗木、嫁接带毒接穗的方式进行远距离传播,也可以通过媒介昆虫柑橘木虱近距离传播。由于HLB的传播特性以及暂无有效药剂等原因,给柑橘HLB的防控造成极大困难。HLB的防控措施主要是清除病树、种植无病毒苗木和防控柑橘木虱,因此开展柑橘HLB的快速、准确检测研究具有重要意义。本文从以下三方面进行了研究:比较研究了3种提取单头柑橘木虱体内HLB病原菌DNA的方法,为快速、准确检测昆虫体内病原菌提供技术支持;对目前常用的四种制样方法:CTAB-Trion法、磁珠法、裂解法和浸提法的核酸提取效果、操作步骤以及成本等方面开展分析比较,并结合环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联用检测,筛选出一种适合大规模柑橘样品HLB检测的制样方法;基于近红外技术柑橘HLB快速检测方法的建立与应用,为田间快速诊断病害提出新的解决思路。以上研究取得研究结果如下:1、对已报道的裂解法和氯仿-异戊醇法以及试剂盒法进行了比较研究,发现3种方法均可以成功提取到单头柑橘木虱总核酸并可用于HLB的PCR检测,但在提取的核酸质量、操作步骤及简易程度、耗时及成本等方面存在差异:核酸质量方面,氯仿-异戊醇法最佳,裂解法和试剂盒法较差;操作步骤及简易程度方面,裂解法和试剂盒法优于氯仿-异戊醇法;耗时方面,裂解法和试剂盒法耗时远远少于氯仿-异戊醇法;成本方面,氯仿-异戊醇法和试剂盒法高于裂解法。2、对四种制样方法:CTAB-Trion法、磁珠法、裂解法和浸提法的制备步骤、核酸质量、耗时、成本以及环保等方面展开评价,并把四种方法获得的核酸与柑橘HLB的LAMP检测技术联用,结果表明:CTAB-Trion法和磁珠法提取的核酸质量最好,其OD260/OD280值在1.8-2.0之间,满足柑橘HLB LAMP检测,但操作步骤繁琐、复杂,成本、耗时较高且CTAB-Trion法需使用苯酚和氯仿试剂;裂解法提取的核酸质量虽不高,但可满足LAMP扩增,同时其操作步骤极少且易,成本低、耗时少,相对环保;浸提法提取的核酸量少、质量差,无法满足LAMP扩增要求。裂解法是柑橘HLB LAMP检测的最佳制样方法,满足大规模柑橘样品的HLB检测要求。3、基于近红外技术检测柑橘HLB的研究中发现:特征图谱显示近红外可用于HLB检测,最佳的判别分析算法是偏最小二乘法-线性判别分析法,理想的光谱信息预处理方法为多元散射校正,使用优化后的模型检测720份田间脐橙叶片的检测结果与常规PCR检测结果符合率可达91%。