番茄黄化曲叶病毒病的防治效果及相关抗性基因的表达特征分析

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番茄黄化曲叶病毒病(Tomato yellow leaf curl virus disease, TYLCVD)是危害番茄(Lycopersicon esculentum Mill)生产的一种病毒病。目前,该病已经成为制约江苏省番茄生产的主要病害之一。TYLCVD由双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)引起,该病毒在烟粉虱和番茄植株内双向存活,自然条件下只能由烟粉虱传播。研究报道烟粉虱种群数量的剧增,随即TYLCVD会大面积暴发。而烟粉虱寄主范围十分广泛,给该病害的防治带来很大难度。本研究从三方面开展实验。一是从控制烟粉虱的种群数量角度,研究了设置防虫网、铺设地膜、间作黄瓜等措施对控制烟粉虱的种群数量和防控TYLCVD的效果。二是研究了烟粉虱对五种不同类型药剂的敏感性,检测施药后烟粉虱体内抗药相关基因CYP6CM1和Coel勺表达情况,为合理用药和烟粉虱抗性治理提供理论基础。三是研究番茄抗病相关基因LeHTl、Permease6勺表达特征与抗病的相关性,为筛选抗性基因进行辅助育种工作奠定基础。研究结果如下:1.设置防虫网较无防虫网烟粉虱种群数量少38.22%。铺设黑白、银黑地膜对烟粉虱种群数量和病害的发生有较好防控效果,黑白地膜、银黑地膜较黑色地膜烟粉虱分别少72.57%,50.59%。设置防虫网与黑白地膜处理TYLCVD发病率较无防虫网设置组低35.49%。间种黄瓜对烟粉虱的种群数量无显著影响,但可减少病害发生,间作黄瓜处理下黑白地膜发病率仅为7.05%,黑色地膜发病率达17.64%。影响TYLCVD发病的因素的主次顺序依次为:防虫网、地膜、间作黄瓜。优组合为:设置防虫网、铺设黑白地膜、间种黄瓜。覆盖紫外吸收膜较覆盖普通PVC膜烟粉虱种群数量少37.64%,紫外吸收膜处理铺设银黑地膜田块发病率最低,仅为9.85%。黄板监测统计的烟粉虱种群数量变化显示,挂置2-9d诱集烟粉虱种群数量增幅最大,诱集烟粉虱成虫数量由少至多依次为,黑白地膜、银黑地膜、透明地膜、无地膜、黑色地膜。2.药剂处理72h后烟粉虱成虫校正死亡率由高到低分别为:4%阿维菌素,98.01%;70%艾美乐,80.91%;5%锐劲特,61.15%;2.5%高效氯氟氰菊酯,40.73%;25%噻嗪酮,低于5%。Semi-quantitive PCR检测发现70%艾美乐处理后,烟粉虱CYP6CM1基因表达量显著升高,Coel基因表达量与药剂处理前无明显差异。4%阿维菌素处理后,CYP6CM1基因表达量显著下降,Coel基因表达量与药剂处理前无明显差异。2.5%高氯氟氰菊酯处理后CYP6CM1基因表达量表达量变化不大,Coel基因表达量稍有增加。25%噻嗪酮处理后CYP6CM1基因稍有增加,Coel基因表达量略有下降。由于不同剂型的靶标基因不同,该CYP6CM1、Coel可能参与抗药性,也可能是烟粉虱成虫的一种应急反应,有待于进一步研究。3.感性材料S与抗性材料TY-2(含Ty-2抗病基因)在接种第2d便检测到病毒,抗性材料TY-1和TY-3(分别含Ty-1,Ty-3抗病基因)分别在接种后3d、15d检测出病毒条带。S和TY-1分别在接种后7d、20d有明显的发病症状;TY-2和TY-3整个生育期均无发病症状。接种后,LeHTl表达量在S中0d处理时无表达,随接种时间增加呈现表达量先上升后下降趋势;在TY-2、TY-3中LeHT1Od时表达量高,随接种时间增加呈下降趋势,TY-1在接种5d时降至最低,随后稍有增加。接种后,Permease基因在S中表达量显著提高,7d后略有降低;TY-1的Permease基因表达量先降低,15d时表达量回升;TY-2的Permease基因在接种后的表达量增加;在TY-3中, Permease基因在接种前后表达水平变化不大,15d时略有升高。由于抗病材料的来源不同,病毒的侵入时间和抗病基因的表达差异较大,表明不同抗源可能含有不同的抗病信号通路和抗病机制。
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