microRNA(miRNA)是一类长度约22nt的非编码小RNA，广泛存在于大多数种类的真核生物体中，参与调控各种生理活动。已有研究表明miR-191在神经、免疫系统的发育和细胞分化等生理过程中具有调控作用，并与癌症、II型糖尿病，以及神经退行性疾病等疾病的发生发展存在一定关联，但目前对miR-191的研究仍以体外功能实验和临床关联分析为主，尚没有miR-191基因敲除的小鼠模型。实验室前期对小鼠各期生精细胞中的小RNA进行了深度测序，发现miR-191在小鼠精母细胞减数分裂晚期和球形精子中的表达量骤然上升，跃居miRNA表达量的第二位。如此高表达的miR-191在雄鼠精子发生中的功能及其作用机制值得探究。CRISPR-Cas（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein）是一种新的基因组编辑技术，通过改变sgRNA（single-guide RNA）序列就能够定点切割双链DNA上的特定靶位点，从而实现基因敲除或突变，相较用传统的基因重组打靶和锌指核酸酶（ZFN）等技术构建基因敲除动物更为快速和高效，为基因功能的研究提供了新的手段。通过在小鼠受精卵胞浆注射Cas9mRNA与靶向miR-191编码区的sgRNA，并将受精卵经体外培养后移植回假孕母鼠子宫，获得了miR-191全身性敲除的F0代小鼠。对34只F0代小鼠尾部基因组DNA的PCR扩增测序，证实其中31只F0代小鼠的miR-191基因序列被敲除，qRT-PCR检测进一步证实这些小鼠睾丸组织中miR-191的表达完全消失。miR-191全身性敲除的F0代雄性和雌性小鼠没有明显的生长和发育异常。交配实验显示，miR-191敲除的雄鼠与对照组雄鼠在生育能力上无显著性差异，HE染色也未发现F0代雄鼠的睾丸和附睾组织与细胞有任何明显的形态异常。目前只进行了初步表型分析，且F0代多为嵌合体小鼠，尚不能排除miR-191敲除在生理压力下以及年老的情况下是否对精子的产生和雄鼠的生殖能力有影响。因此，正在继续繁育以获得纯合F1代小鼠并进行深入的表型分析。