猪IgGⅡ类Fc受体(FcγRⅡ)基因克隆与表达

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Fc受体(FcR)为特异亲和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的细胞表面分子,广泛表达于免疫辅助细胞和效应细胞,具有许多重要的生理功能,是体液免疫与细胞免疫的联系纽带,在机体免疫调节中起关键作用。目前仅人和小鼠的三类IgGFc受体(FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγⅢ)研究的较为深入。 本研究利用生物信息学和分子生物学技术,首次克隆了猪IgGⅡ类Fc受体cDNA,并通过玫瑰花环形成实验(EA)进一步鉴定了配体亲和特性。即用人CD32氨基酸序列检索NCBI的EST数据库(包括除人和老鼠以外的所有物种核苷酸序列)(tBLASTn),发现了一个高同源序列。再采用cDNA快速扩增技术(RapidamplificationofcDNAends,RACE)从猪外周血白细胞cDNA中分别扩增到了3’端、5’端以及全长cDNA序列,获得了猪IgGⅡ类Fc受体(FcγRⅡ)基因,命名为swFcγRⅡ。swFcγRⅡ全长1488bp,编码297个氨基酸的跨膜糖蛋白,包括两个Ig样结构域,胞内区含有基于酪氨酸的受体抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif,ITIM)。swFcγRⅡ氨基酸序列分别与人和老鼠的同源性为67%和52%。随后,RT-PCR检测到了swFcγRⅡmRNA在外周血白细胞、肝脏、肺脏和肠系膜淋巴结有较高表达。 将swFcγRⅡORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA构建成重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ,再用脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环实验鉴定了swFcγRⅡ配体亲和特性。swFcγRⅡ的克隆对于进一步了解猪IgG与受体间的相互作用以及开发新型免疫制剂有重要意义。
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