烟粉虱MED隐种次生内共生菌Cardinium的遗传分化、定位分布及其对宿主生物学的影响

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生物入侵威胁着全世界的自然生态系统,尤以对农业生态系统危害为甚。烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是世界范围内的超级害虫,也是一种复合种,到目前为止,研究证明其至少含有40个不同的隐存种,其中Mediterranean(MED)和Middle East-Asia Minor 1(MEAM1)是入侵我国的两种主要烟粉虱隐种。烟粉虱体内携带有种类丰富、功能多样的内共生菌,包括1种初生内共生菌和7种次生内共生菌。其中,次生内共生菌Caidinium作为一种新发现的共生菌逐渐进入研究者视野。长期的田间检测发现Cardinium菌在烟粉虱MED隐种体内的感染率逐渐上升。因此,我们开始探索Cardinium菌在我国烟粉虱MED隐种中的进化;在不同发育阶段的位置及拷贝数变化;以及对MED隐种个体发育和生物学影响。研究结果如下:1.本研究采用Caidinium的16s rDNA基因和gyrB基因的特异性引物,通过PCR扩增的方法对我国56个地区的烟粉虱样本进行了测序。结果表明:中国不同地区的烟粉虱MED隐种感染Cardinium的现象较为普遍,不同地区烟粉虱MED隐种的Caidinium gyrB基因和16s rDNA基因序列完全一致,寄主内无遗传分化。此外,烟粉虱MED隐种感染的Cardinium gyrB基因和16s rDNA基因聚为A组。说明入侵我国的烟粉虱MED隐种感染的Cardinium隶属A组。研究结果表明烟粉虱MED隐种感染的Caidinium类型较为单一。2.利用荧光原位杂交技术,明确入侵我国烟粉虱MED隐种体内携带的初生内共生菌(Portiera)和次生内共生菌(Hamiltonella和Cardinium)在不同发育阶段虫体内的定位和分布,发现不同阶段均携带3种共生菌,Portiera和Hamiltonella菌集中分布于含菌细胞内,其中Hamiltonella菌呈环行包裹于含菌细胞周边,Cardinium菌呈现出在菌胞中集中分布,也随机分布于虫体其他部位或器官的两种分布类型。3.利用荧光定量PCR技术定量分析Cardinium菌在寄主烟粉虱不同发育阶段的拷贝数变化,结果发现Cardinium菌在卵期出现一定的含菌量,其可能随母代垂直传播到子代卵内,随后含菌量上升,在1龄出现小高峰,之后在2龄和3龄降到最低。在3龄后期含菌量急速上升,初羽化3天后达到最高峰。待羽化7天后含菌量恢复,保持在高于卵期的含菌量。4.Cardinium菌对烟粉虱成虫前期发育历期存在一定影响,但只对2龄和3龄若虫存在显著影响;此菌对烟粉虱的成虫寿命,产卵量影响不显著,对后代性比影响显著,雌性比例显著增加。
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