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目的：探讨Ezrin蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤临床病理特征的关系。方法：1.收集126例骨肉瘤组织石蜡标本及27例骨软骨瘤组织石蜡标本,通过免疫组化染色检测标本中Ezrin蛋白表达情况；2.分析骨肉瘤组织中Ezrin蛋白表达与患者性别、年龄以及肿瘤直径、病理分型、Ennecking分期、位置、肺部转移等临床病理特征的关系。结果：1.骨肉瘤组织中Ezrin蛋白阳性率(81.74%)明显高于骨软骨瘤组织(29.63%),差异有显著性(,=35.63,P<0.01)；2.伴有肺部转移的骨肉瘤组织中Ezrin蛋白阳性率(97.78%)较无肺部转移者(72.84%)增加,差异有显著性(x2=15.68,P<0.05),低分化骨肉瘤组织中Ezrin蛋白阳性率(94.87%)也高于中+高分化者(75.86%)(x2=12.32,P<0.05),但是在不同性别、年龄、肿瘤直径、Ennecking分期及部位的骨肉瘤组织中Ezrin蛋白阳性率并无显著性差异(均P>0.05)。结论：Ezrin蛋白在骨肉瘤组织中明显升高,且与肿瘤肺转移及恶性程度相关。图8幅,表2个,参考文献23篇。目的：应用小干扰RNA (siRNA)技术特异性下调Ezrin蛋白在骨肉瘤MG-63细胞中的表达,探讨Ezrin蛋白在骨肉瘤侵袭、转移中的作用。方法：1.设计3对Ezrin siRNA (Ezrin siRNA1、Ezrin siRNA2、Ezrin siRNA3),转染MG-63细胞,采用荧光实时定量PCR、Western blotting检测细胞Ezrin mRNA和蛋白表达水平,筛选出1对干预效果最好的Ezrin siRNA。2.将干预效果最好的Ezrin siRNA、Scramble siRNA分别转染MG-63细胞,并设立1组未转染的空白对照组,采用MTT法检测细胞增殖；3.通过Transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,细胞黏附实验测定细胞的黏附能力4.利用Western blotting检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、波形蛋白、Src、磷酸化Src (p-Src)、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)表达；5.30只裸鼠随机分成3组：空白对照组(n=10)、Scramble siRNA组(n=10)和Ezrin siRNA组(n=10),分别通过鼠尾静脉注射未转染siRNA、转染Scramble siRNA及Ezrin siRNA的MG-63细胞,第42天处死裸鼠,比较实验前后体重及肺表面结节个数。结果：1.Ezrin siRNA3对Ezrin mRNA和蛋白表达的抑制作用优于Ezrin siRNA1、Ezrin siRNA2(P<0.01),因此本研究选择Ezrin siRNA3进行后续研究；2.在24h、48h和72h, Ezrin siRNA组吸光度(OD)值小于空白对照组、Scramble siRNA组(P<0.05);3. Transwell迁移、侵袭实验显示, Ezrin siRNA组穿膜细胞数明显低于空白对照组、Scramble siRNA组(P<0.05),同时,Ezrin siRNA组细胞黏附率较空白对照组、Scramble siRNA组降低(P<0.05)；4.与空白对照组、Scramble siRNA组比较,Ezrin siRNA组MMP-2、MMP-9、N-钙粘蛋白、波形蛋白、p-Src、p-Akt表达水平降低(P<0.01),而E-钙粘蛋白表达水平升高(P<0.01),但Src、Akt表达水平无变化(P>0.05)；5.Ezrin siRNA组实验后裸鼠平均体重较空白对照组、Scramble siRNA组增加(P<0.05),但肺表面结节个数较空白对照组、Scramble siRNA组减少(P<0.05)。结论：1.运用siRNA下调Ezrin蛋白表达可抑制MG-63细胞增殖、侵袭和转移；2.Ezrin siRNA对MG-63细胞侵袭、转移的抑制作用是通过降低MMP-2、MMP-9、N-钙粘蛋白和波形蛋白表达、增加E-钙粘蛋白表达以及抑制Src、Akt磷酸化实现的。图22幅,表9个,参考文献53篇。目的：观察黄芩素对MG-63细胞增殖、侵袭及Ezrin表达、活性的影响,探讨黄芩素治疗骨肉瘤的相关机制。方法：1.体外培养MG-63细胞,利用无水乙醇将黄芩素稀释成6个浓度梯度：1、2、4、8、16.32μmol/L,分别处理细胞24h、48h、72h,采用MTT法检测细胞增殖,选择黄芩素干预48h,计算黄芩素作用的50%抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)；2.随后以无水乙醇(对照组)及10.15gmol/L黄芩素处理MG-63细胞48h,采用Transwell迁移、侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力；3.通过细胞黏附实验测定细胞的黏附能力；4.行荧光实时定量PCR.Western blotting检测Ezrin mRNA及Ezrin、磷酸化Ezrin(p-Ezrin)蛋白表达。结果：1.随着黄芩素浓度的增加和处理时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐升高,差异均有显著性(P<0.01),黄芩素干预48h对MG-63细胞增殖的IC50约为18.35μmol/L:2.Transwell迁移、侵袭实验显示,10.15μmol/L黄芩素组穿膜细胞数均低于对照组(P<0.05,0.01),黄芩素15μol/L组穿膜细胞数又低于10μmol/L组(P<0.05)；3.10、15μmol/L黄芩素组细胞黏附率较对照组降低(P<0.05,0.01),且黄芩素15μmol/L组细胞黏附率低于10μmol/L组(P<0.05),4.与对照组比较,10、15μmol/L黄芩素组Ezrin mRNA和Ezrin、p-Ezrin蛋白表达水平明显降低,(P<0.05,0.01),黄芩素15μmol/L组上述指标低于10μmol/L组(P<0.05)。结论：1.黄芩素呈时间和剂量依赖性抑制MG-63细胞增殖；2.黄芩素可下调Ezrin mRNA、蛋白表达及其磷酸化活化水平。图9幅,表2个,参考文献37篇。