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磷酸特地唑胺(Tedizolid phosphate)是第二代新型恶唑烷酮类抗菌药,由美国CUBIST生物制药公司研发。作为特地唑胺的前药,在口服或静脉注射后,磷酸特地唑胺能通过磷酸酯酶的催化转化为特地唑胺。特地唑胺的抗菌机理是与细菌核糖体的50S亚基结合,从而抑制合成细菌蛋白质并发挥抗菌效果。因此,它与其它抗菌药发生交叉耐药的现象较为少见。临床研究表明,与利奈唑胺(第一代恶唑烷酮类抗菌药)相比,磷酸特地唑胺的半衰期更长,临床疗效更好,且缩短了近一半的治疗周期。然而,磷酸特地唑胺在室温下不稳定,易水解,贮藏和运输不便。用于肺炎的治疗,肺部靶向性不高。而单纯靠增加剂量来提高肺部药物浓度和平均滞留时间,会导致耐药性发生的风险。脂质体,作为一种极具潜力的缓控释系统,水溶性药物和脂溶性性药物皆可被其包封。尤其作为抗菌药物载体有着诸多优势:①.改善药物代谢动力学和生物学分布;②.提高抗菌药的抗菌效果并降低致病菌对于抗菌药物的耐药性;③.具有部位靶向选择性。此外,粒径和电位是影响脂质体被动肺靶向的重要因素。因此,阳离子脂质体除具有以上优势外,由于粒径较普通脂质体大且荷正电具有较好的肺靶向性,可以提高肺部的药物浓度及有效浓度维持时间;还可以减少脂质体在贮存期间的粒径变化,维持脂质体的稳定性。总之,对于抗菌药载体来说,阳离子脂质体不仅稳定性和肺靶向性有所提高,而且具有生物膜亲和性强,对于肺炎的治疗具有不可替代的优势。本课题以磷酸特地唑胺为模型药物,以注射用大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,采用逆相蒸发法法制备磷酸特地唑胺阳离子脂质体。目的在于提高磷酸特地唑胺的稳定性和部位靶向性,改善治疗效果,降低耐药性的发生。本课题的主要内容包括磷酸特地唑胺普通脂质体和阳离子脂质体的制备及性质表征;体外释药性和初步安全性评价;小鼠体内药物动力学及组织分布试验研究评价磷酸特地唑胺阳离子脂质体的缓释性和靶向性。1.磷酸特地唑胺普通脂质体的制备与性质表征建立了紫外分光光度法(UV)测定磷酸特地唑胺的含量,方法学考察结果表明:辅料对药物的含量测定干扰较小,且精密度和回收率的结果也都满足测定的要求。超滤离心法具有高回收率,重现性好等优点,因此可用于测定脂质体的包封率。根据磷酸特地唑胺的溶解特性,选择粒径、包封率和载药量为考察指标,对制备方法和处方工艺进行了较为系统的研究。最后确定了采用逆相蒸发法来制备磷酸特地唑胺的脂质体,并结合单因素试验和正交试验,最终优选出最佳的处方工艺;按照最佳处方工艺制备的磷酸特地唑胺脂质体形状呈类球形,且大小分布均匀,平均粒径为(184.9±8.3)nm,平均Zeta电位为(-22.8±0.15)mV,包封率为(55.10± 1.94)%,载药量为(4.51 ±0.24)%,平均 pH 值为 6.83 ±0.06,符合注射要求;处方和制备工艺合理可行。2.磷酸特地唑胺阳离子脂质体的制备与性质表征分别制备了壳聚糖包裹的磷酸特地唑胺脂质体(c-TDZA-Lips)和硬脂胺修饰的磷酸特地唑胺脂质体(SA-TDZA-Lips),通过对分子量、用量、体积比以及电位等单因素进行考察,确定了 c-TDZA-Lips的最佳处方。通过对电位的单因素考察,确定了 SA-TDZA-Lips的最优处方。制备的c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips在透射电镜下观察均呈类球形,大小分布均匀。两种磷酸特地唑胺阳离子脂质体的Zeta电位均从荷负电转变成了荷正电。c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips的粒径分别为(214.3±4.2)nm 和(194.9±2.93)nm,平均 Zeta 电位分别为(19.5±2.10)mV 和(20.4±1.10)mV,包封率分别为(55.38±2.18)%和(53.52土2.18)%,平均pH值分别为4.30和8.86,符合注射要求;三批脂质体的重现性试验结果表明,处方工艺重现性良好,制备工艺可行。3.磷酸特地唑胺普通脂质体与阳离子脂质体的体外释药性及初步安全性评价采用动态膜透析法比较TDZA-Lips,c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三种磷酸特地唑胺脂质体制剂的体外释放特性。相比于TDZA-Inj组,TDZA-Lips,c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三种脂质体体外释药曲线相似,均具有不同程度的缓释效果,且释放曲线与weibull方程相符。其中c-TDZA-Lips释放相对更缓慢,SA-TDZA-Lips次之。另外,从体外溶血试验的结果来看,TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips都未发现溶血或凝集,因此制剂安全可靠,可供静脉注射。而c-TDZA-Lips除2号管以外,其余试管均出现不同程度的溶血,初步安全性不合格,不可用于静脉注射。4.体内药物动力学和组织分布研究建立了高效液相色谱法(HPLC)测定磷酸特地唑胺在小鼠血浆和各组织器官中的浓度。以磷酸特地唑胺注射剂为对照制剂,研究小鼠尾静脉注射TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips后的血浆药物动力学和在心、肝、脾、肺、肾、脑等组织中分布的变化,计算了各个制剂组在小鼠体内药物动力学参数和体内各组织器官的靶向参数。小鼠体内药物动力学研究结果表明,与TDZA-Inj组相较,TDZA-Lips组和SA-TDZA-Lips组的平均滞留时间(MRT 0-6)分别延长到2.39倍、2.80倍,血浆清除率CL分别减少了 0.64倍和0.71倍,消除半衰期分别延长到1.15和1.51倍,AUC0-∞分别增加了 1.76倍和2.40倍。这些变化都有助于提高磷酸特地唑胺的抗菌效果。小鼠体内组织分布试验结果表明,经硬脂胺修饰后的SA-TDZA-Lips组在肺部的AUC增加了 0.72倍。这是由于经硬脂胺修饰后的脂质体带有正电荷,与肺部细胞的亲和力增强,摄取增加。SA-TDZA-Lips组在肺部的相对摄取率Re为1.527>1,具有肺靶向性。这些均说明硬脂胺的修饰使得脂质体在肺部的分布增加,靶向性增强,这对于肺部炎症的治疗有很大优势。综上,本研究构建的硬脂胺修饰的磷酸特地唑胺阳离子脂质体,与预期的药物动力学和组织分布特点相符。由于抗菌药应用广泛,是大部分抗感染治疗的基本原则。因此,此项研究所构建的磷酸特地唑胺阳离子脂质体有望成为上用于慢性肺炎临床治疗的重要载体。