【摘 要】
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伴随近海养殖农业的发展,养殖区环境质量问题日益突出,给养殖产业造成巨大经济损失,其中致病弧菌是影响近海养殖的主要因素之一,故以监控致病弧菌对近海养殖农业健康状况影响的环境监测预警管理成为热点问题。实验以栉孔扇贝为指示生物,选取了扇贝免疫酶活性、免疫基因表达量等为生物标记物,研究了三个温度（13℃,19℃,25℃）条件下,不同哈维弧菌浓度（104cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL）
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伴随近海养殖农业的发展,养殖区环境质量问题日益突出,给养殖产业造成巨大经济损失,其中致病弧菌是影响近海养殖的主要因素之一,故以监控致病弧菌对近海养殖农业健康状况影响的环境监测预警管理成为热点问题。实验以栉孔扇贝为指示生物,选取了扇贝免疫酶活性、免疫基因表达量等为生物标记物,研究了三个温度（13℃,19℃,25℃）条件下,不同哈维弧菌浓度（104cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL）对栉孔扇贝的免疫活性的影响;同时,于不同月份采集了近海养殖对照区、养殖密区水域两种深度下的水样,及研究了近海扇贝养殖产地环境中环境因子对扇贝养殖区微生物群落结构的影响。从近海养殖中指示生物的免疫水平、微生物群落结构与多样性的变化及海洋理化环境,综合分析近海环境及致病弧菌对扇贝养殖环境的影响,归纳病原微生物流行致病规律和传播途径,评估养殖环境适宜性,为在近海养殖区致病弧菌引起扇贝疾病暴发的环境预警管理方向提供理论依据。得到如下研究结论:（1）哈维弧菌感染指示生物栉孔扇贝,生物标记物中免疫相关酶活性与温度密切相关,在19℃温度下栉孔扇贝酶活性最强,在25℃和13℃都会受到抑制,其中13℃低温不利于扇贝生长和细菌的侵染,25℃高温降低了栉孔扇贝生理活性,且高温利于病原菌致病性及增值速率的提高,更易造成病原菌暴发及扇贝大面积死亡。在近海养殖环境预警管理中较高水温期间监测指示生物栉孔扇贝生物标记物免疫酶活性较高时,应给予足够的重视。（2）指示生物栉孔扇贝在25℃高温胁迫下通过热休克反应抵抗高温刺激,对机体起到保护作用,生物标记物中HSP90表达量显著上调,而其生物标记中免疫C型凝集素基因lectin-2表达的活性受到抑制;在13℃、19℃时下,栉孔扇贝免疫相关基因表达量与细菌浓度呈现显著正相关性,在25℃下,高浓度细菌对lecin-2免疫基因表达起到抑制作用,其表达量低于中浓度106cfu/m L组,但差异不显著。在监测指示生物栉孔扇贝过程中生物标记中免疫基因HSP90表达量升高显著而C型凝集素表达量降低显著,应予以重视。（3）近海扇贝养殖产地环境的监测中显示除5月份外的大多数月份,氮元素成为影响微生物群落多样性的重要环境因素;对于不同水层,微生物多样性和丰度的主要影响因子是pH、盐度、亚硝酸盐、氨盐、磷酸盐（显著相关）。微生物群落结构的主要影响因子是温度、悬浮物、氮元素、磷酸盐,DO则显著影响8 m深水层中物种的分布,且8 m深水层微生物多样性及丰度受环境因子影响较小。环境因子对于弧菌属分布的影响表明,对于弧菌属而言,其在5月份栉孔扇贝8 m深水层处γ变形菌纲中的弧菌属（Vibrio）在属水平相对丰度的鉴定中高达60.8%,显著高于对照区和其余月份;弧菌属的数量占比与温度和pH呈正相关关系（pH呈显著正相关）。监测近海养殖区微生物群落结构及多样性时,及时分析致病弧菌群落结构和丰度的变化,以此监控治病弧菌的增长状况及暴发趋势,预防治病弧菌暴发引起的近海栉孔扇贝养殖大规模疾病的暴发。当弧菌属占比增加丰度增高时,综合环境因子中主要影响因素温度氮磷等的变化及生物标记物种栉孔扇贝免疫因子的变化水平,为近海养殖环境健康型做出预警管理,同时需对5月份弧菌的暴发应进一步探讨并作出相应防御对策。（4）在近海养殖区环境质量预警管理中,研究显示该地养殖模式较为合理,故推荐日照市近海栉孔扇贝养殖区的养殖模式为:在2月购进扇贝新种,春天开始养苗,6月、7月疏苗进行筏架养殖（此时扇贝密度较低）,成长期半年到一年,与次年1-5月前收获（同年2月可购置新苗,分区进行新一轮栉孔扇贝养殖）,可避开高温密集养殖发病期,合理利用时间和空间,达到控制弧菌污染造成栉孔扇贝疾病暴发的目的。
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