目的：　　 1.通过观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺腺癌上皮细胞(A549细胞)后三个不同时间点(12h、24h、48h) Toll样受体3(TLR3)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA及蛋白表达变化，探讨TLR3介导RSV感染所致炎症免疫反应的分子机制。　　 2.观察不同剂量人工及天然过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮和15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)、PPARγ特异性阻滞剂(GW9662)和核转录因子-κB抑制剂（NF-κB抑制剂）(PDTC)干预对RSV感染A549细胞上述mRNA及蛋白表达的影响，探讨PPARγ激动剂的作用机制。　　 方法：　　 A549细胞进行传代培养，待细胞长至80％左右时，传代接种子六孔板，F12K培养液培养24-48小时，细胞铺满六孔板后，随机分为6组:分别为15d-PGJ2+RSV组（A组），罗格列酮+RSV组（B组）、DMSO+RSV组（C组）、PDTC+RSV组(D组)、GW9662+罗格列酮+RSV组（E组）和细胞对照组（F组）。A-E组以100TCID50RSV吸附2h后加培养液培养以产生RSV感染的细胞模型。RSV吸附A549细胞前A、B、D组分别予15d-PGJ2（10-20μmol/L）、罗格列酮（10-30μmol/L）、PTDC（10μmol/L）预处理30min，E组在罗格列酮（30μmol/L）预处理前先以6W9662（30μmol/L）预处理30min，C组用0.1％DMSO预处理30min，各组分别在培养12h、24h、48h后收获上清液和细胞提取蛋白和RNA。实时荧光定量RT-PCR检测各组TLR3、TNF-α和iNOS mRNA表达，Western Blot方法检测TLR3蛋白表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α蛋白水平。　　 结果：　　 1.病毒滴度的测定:病毒的半数感染量(TCID50)通过Reed-Muench公式计算为10-5.6/50μl。感染A549细胞采用的病毒攻击量为100TCID50，即10-3.650μl。　　 2.RSV感染后TLR3、iNOS、TNF-αmRNA及蛋白表达的变化与F组相比，C组TLR3、iNOS、TNF-αmRNA及TLR3、TNF-α蛋白表达在12h、24h和48h均明显升高(均P＜0.05)。其中TLR3、iNOS、TNF-αmRNA表达在24h达高峰，48h有所下降，与12h的表达量相近，差异无统计学意义(均P＞0.05)。TLR3、TNF-α的蛋白表达量均在48h达高峰，与12h比较差异有统计学意义(均P＜0.05); RSV感染组在各个时间点TLR3、iNOS、TNF-αmRNA及TLR3、TNF-α蛋白的表达量均高于PDTC组（均P＜0.05）。PDTC组各个时间点的TLR3、iNOS、TNF-αmRNA及TLR3、TNF-α蛋白表达均高于细胞对照组(均P＜0.05)。　　 3.PPARγ激动剂干预对RSV感染A549细胞TLR3 mRNA及蛋白表达的影响:在12h、24h、48h三个不同时间点上，各个浓度的15d-PGJ2和罗格列酮干预后，对TLR3 mRNA和蛋白表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义(均P＜0.05)。在同一时间点上，不同浓度的15d-PGJ2和罗格列酮，随着药物剂量的增加，TLR3mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降，与C组相比，差异有显著统计学意义(均P＜0.05)，但仍高于F组，差异亦有统计学意义（均P＜0.05)，其中20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后TLR3 mRNA和蛋白表达量最低。C组与E组相比，TLR3 mRNA和蛋白表达量的差异无统计学意义(均P＞0.05)。　　 4.PPARγ激动剂干预对RSV感染A549细胞iNOS mRNA表达的影响:同一时间点，A组、B组与C组相比，随着药物剂量的增加，iNOSmRNA的表达量均呈剂量依赖性下降(均P＜0.05);20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后12h、24h、48h iNOS mRNA的表达量最低，但仍高于F组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。各个浓度的15d-PGJ2和罗格列酮对iNOS mRNA表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义(均P＜0.05)。E组与C组相比，iNOS mRNA的表达量差异无统计学意义(均P＞0.05)。　　 5.PPARγ激动剂干预对RSV感染A549细胞TNF-α mRNA及蛋白表达的影响:各个浓度的15d-PGJ2和罗格列酮对TNF-α mRNA和蛋白表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义（均P＜0.05）。同一时间点，随着药物剂量的增加，A组和B组的TNF-α mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降，其中20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后TNF-α mRNA和蛋白的表达量最低，与C组相比差异有显著的统计学意义（均P＜0.05）;但仍高于F组，差异亦有统计学意义（均P＜0.05）。C组与E组相比，TNF-αmRNA和蛋白的表达量差异无统计学意义（均P＞0.05）。　　 结论　　 1.RSV感染可上调A549细胞TLR3、TNF-α和iNOS mRNA的表达，诱导TLR3蛋白的表达，升高TNF-α的分泌量，表明RSV感染诱导的炎症反应可能与TLR3活化的信号转导途径有关。　　 2.罗格列酮、15d-PGJ2及PDTC均能降低RSV感染A549细胞TLR3、TNF-α、iNOSmRNA及TLR3、TNF-α蛋白表达，而GW9662能够拮抗罗格列酮的作用，提示PPARγ激动剂可通过抑制TLR3、TNF-α和iNOS的表达而发挥抗炎作用。　　 3.罗格列酮和15d-PGJ2能以剂量依赖性方式抑制TLR3、TNF-α、iNOS mRNA及TLR3、TNF-α蛋白表达，作用在12h最强，其最佳剂量分别为30μmol/L和20μmol/L。