竹叶黄酮提取、纯化及抗氧化活性研究

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竹叶中的黄酮类物质具有抗菌、抗氧化、抗自由基、抗衰老、抗肿瘤、保护心血管等多种生物和生理功效的天然活性成分。本论文主要以长沙青皮竹叶为研究对象,采用紫外分光光度法测定了长沙青皮竹,毛竹,假毛竹,琴丝竹,斑竹,水竹六种竹叶中总黄酮含量;采用高效液相色谱仪建立了同时测定包括长沙青皮竹叶在内的六种竹叶提取物中荭草苷与芦丁含量的方法;借助正交优化试验设计,研究确定了长沙青皮竹叶黄酮的提取工艺;运用单因素试验法初步确定长沙青皮竹叶黄酮聚酰胺纯化条件;以维生素C(Vc)作参照,采用经聚酰胺纯化后的长沙青皮竹叶黄酮和毛竹叶黄酮对ABTS自由基和DPPH自由基进行体外抗氧化试验,确定了长沙青皮竹叶黄酮的抗氧化能力。主要研究结果:(1)以芦丁为标准物采用紫外分光光度法测定了长沙青皮竹、毛竹、假毛竹、水竹、斑竹和琴丝竹六种竹叶中黄酮含量。得到芦丁线性回归方程A=0.018C—0.004,R2=0.9999,在0~34.6mg·L-1浓度范围内,线性关系良好。重复性、回收率和稳定性试验表明该法切实可行。(2)建立了同时测定长沙青长沙青皮竹、毛竹、假毛竹、水竹、斑竹和琴丝竹等六种竹叶提取物中荭草苷与芦丁的高效液相色谱方法,荭草苷与芦丁基线分离良好。荭草苷线性回归方程S=37762c+65734,R2=0.9997;芦丁线性回归方程S=30914c-4862,R2=0.9997,精密度、重复性、稳定性和回收率试验表明该法切实可行。(3)优化了长沙青皮竹叶黄酮的乙醇提取法工艺条件。在单因素试验基础上采用正交优化设计,得到优化提取工艺为乙醇浓度70%,固液比例1:25(g/mL),提取3次,每次1.5h,各因素对黄酮得率的影响顺序为乙醇浓度>提取次数>提取时间≈固液比例。在此条件下黄酮得率为1.85%。(4)研究了长沙青皮竹叶黄酮的聚酰胺柱层析纯化工艺。通过与AB-8大孔树脂的对比,得出聚酰胺更适合纯化长沙青皮竹叶黄酮,聚酰胺纯化工艺条件为浓度为1.08mg·mL-1的原料液4BV,以2BV·h-1流速上聚酰胺柱,水洗至无色后采用8BV的80%乙醇溶液洗脱,得到纯化产物中黄酮含量可达51.2%,比原料纯度提高了近4倍且转移率达到83%.(5)以Vc为参照,研究了长沙青皮竹叶黄酮及毛竹叶黄酮对DPPH口ABTS自由基的清除效果,以清除率代表抗氧化能力,以半抑制浓度IC50表示抑制强度。长沙青皮竹叶黄酮、毛竹叶黄酮和Vc清除DPPH自由基的IC5o值分别为78.2mg-L-1、107.7mg-L-1和42.9mg-L-1,清除ABTS自由基的IC50值分别为75.0mg·L-1、72.0mg·L-1和37.1mg·L-1。长沙青皮竹对DPPH自由基清除能力为维生素C的54.9%,对ABTS自由基的清除能力为维生素C的49.5%,表明长沙青皮竹叶黄酮对这2种自由基具有一定的清除能力。
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