论文部分内容阅读
Vf基因是源自Malusfloribunda821的显性单基因,对苹果黑星病表现抗性。本研究以本课题组培育的8个苹果新品种为试材,对农杆菌介导的Vf基因遗传转化体系进行了研究。
采取试材枝条顶芽和侧芽,应用改良MS培养基,建立了试材无菌苗培养体系。在初代培养基中,添加抗坏血酸可有效抑制芽褐变。在继代培养基中,添加BA1.00mgL-1和NAA0.05mgL-1,其无菌苗增殖倍数和生长率最高,最适于无菌苗增殖快繁。
以苹果新品种“福祥”为试材,研究了基本培养基、激素种类及配比、外植体类型和处理方式、无菌苗继代天数和碳源种类等对其外植体再生效果的影响。叶片再生不定芽的最佳条件:取自继代后28天的无菌苗叶片,切伤后,正面向上接种于附加BA4.00mgL-1、NAA0.05mgL4、蔗糖30.0gL-1和琼脂6.5gL-1的改良MS培养基上,暗培养21天后,转入光下培养,21天获得叶片再生不定芽。茎段再生的最佳条件:取自继代后14天的无菌苗上不带芽的茎段,接种于附加BA4.0mgL-1、NAA0.2mgL-1、蔗糖30.0gL-1和琼脂6.5gL-1的改良MS培养基上,暗培养21天后,转入光下培养,25天获得茎段再生不定芽。
以苹果新品种“福祥”为试材,应用农杆菌介导法,建立了苹果Vf基因遗传转化体系。取经过液体预培养后的叶片和茎段外植体,并将叶片切伤,用适宜浓度的带有Vf基因的EHA105农杆菌液分别对这两种外植体振荡培养,然后将叶片和茎段外植体分别转移到固体和液体培养基上进行共培养,再将外植体转移至含有头孢噻肟的去感染培养基上去除农杆菌,采用卡那霉素度梯度选择策略,逐步提高其选择压力,进行选择培养。农杆菌侵染后30天获得了叶片外植体抗卡那霉素的再生不定芽;35天获得了茎段外植体抗卡那霉素的再生不定芽。表明此方法高效可行,能够获得抗卡那霉素的转基因新梢。