【摘 要】
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目的在前期细胞及动物水平相关研究基础上,初步探讨Hsa-mir-129抑制人肾癌SN12-PM6细胞的分子机制。方法应用lipofectamine2000MT将Hsa-mir-129(GFP)及空白质粒载体(GFP)分别
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目的在前期细胞及动物水平相关研究基础上,初步探讨Hsa-mir-129抑制人肾癌SN12-PM6细胞的分子机制。方法应用lipofectamine2000MT将Hsa-mir-129(GFP)及空白质粒载体(GFP)分别转染至293T细胞及SN12-PM6细胞。转染24—48小时后,荧光显微镜下观察转染效率。噻唑蓝(MTT)法测定SN12-PM6细胞的增值抑制率。流式细胞仪检测293T细胞及SN12-PM6细胞的细胞周期。分析细胞周期结果,进而设计引物,RT-PCR测定基因Rb1、P21、P53及Cyclin D1表达的变化。结果Hsa-mir-129(GFP)对293T细胞增值及相关基因的表达无显著影响。但瞬时转染至SN12-PM6细胞后96h细胞抑制率36%,对照转染空载体为8%。流式测定SN12-PM6细胞周期明显阻滞在G1-S期。RT-PCR测定Rb1、P21及P53基因表达明显上调,Cyclin D1基因的表达无变化。结论Hsa-mir-129可抑制SN12-PM6细胞增值,使其停滞在G1-S期,其机制可能为上调Rb1、P21及P53基因表达。
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