酪氨酸酶(Tyrosinase, EC.1.14.18.1)又称多酚氧化酶(PPO),广泛存在于微生物、动植物及人体中,是结构复杂的含铜氧化还原酶。在真菌、细菌、动物中由于它还具有单酚氧化能力被称为酪氨酸酶。酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶。因此,对此酶的酶学特性,催化作用机理和抑制机理的研究,具有重要的意义。本论文分两部分,第一部分主要是马铃薯多酚氧化酶及柿叶多酚氧化酶抑制剂的提取,第二部分主要将各种不同化学抑制剂及柿叶提取物对蘑菇酪氨酸酶和马铃薯多酚氧化酶的抑制效应进行比较研究。实验表明,直接用0.05 mol/L PBS缓冲液提取马铃薯PPO比丙酮法更有效,特别适用于PPO活性低的品种。本实验所用的闽薯一号,PPO活性特别低,用此法提取经部分纯化可得到比活力为79.83 U/mg,纯化倍数为16.19的马铃薯多酚氧化酶。本实验所用的六种苯甲酸的烷基取代物对蘑菇酪氨酸酶和马铃薯多酚氧化酶的抑制作用强度依次是:对辛基苯甲酸>对庚基苯甲酸>对己基苯甲酸>对戊基苯甲酸>对丁基苯甲酸>对丙基苯甲酸,抑制作用随着碳链的增加而增强。这些抑制剂对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用类型为反竞争性抑制,而对马铃薯多酚氧化酶的抑制作用类型为非竞争性抑制。蘑菇酪氨酸酶具有单酚酶和二酚酶的活性,而马铃薯PPO却没有单酚酶的活性。苯甲酸4-卤代物对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶及马铃薯PPO的抑制作用强度是4-溴代苯甲酸> 4-氯代苯甲酸> 4-氟代苯甲酸。苯甲酸4-卤代物对两种酶的抑制类型均表现为非竞争性可逆抑制。不论对于蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶,还是马铃薯PPO,抑制强度都是4-甲基水杨酸大于5-甲基水杨酸,二者对蘑菇酪氨酸酶的抑制属于混合性抑制,而对马铃薯PPO的抑制属于非竞争性抑制。柿叶提取物对蘑菇酪氨酸酶及马铃薯多酚氧化酶具有明显的抑制作用,柿叶50%乙醇提取物比水提取物的抑制作用更强,柿叶提取物对两种酶的抑制作用均为非竞争性可逆抑制。没食子酸香叶酯对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用比没食子酸十二烷基酯更强,没食子酸十二烷基酯表现为反竞争性抑制类型,而没食子酸香叶酯表现为混合型抑制类型。三种氟代苯甲醛中对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用最强的是4-氟代苯甲醛,3-氟代苯甲醛次之,2-氟代苯甲醛最弱。2-氟代苯甲醛表现为混合性抑制,而3-氟代苯甲醛、4-氟代苯甲醛则表现为竞争性抑制。通过比较,可以看出相同抑制剂对两种酶的抑制不完全相同,表明这两种来源不同的酶在结构上既有一定的相似性,同时又存在某些差异,具有种属特异性。