【摘 要】
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细毛石花菜(Gelidium crinale)是石花菜科石花菜属红藻,是一种民间食用草本植物。近年来,红藻中分离出的硫酸多糖具有多种生物活性,引起了越来越多的关注。动脉粥样硬化是导致人类大多数死亡的根本原因,对各个国家的影响巨大。内皮损伤是导致动脉粥样硬化的重要环节,而炎症反应和氧化应激与动脉粥样硬化的发展密切相关。本研究为细毛石花菜的高值化利用提供实验依据。首先从细毛石花菜中提取纯化硫酸多糖(G
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细毛石花菜(Gelidium crinale)是石花菜科石花菜属红藻,是一种民间食用草本植物。近年来,红藻中分离出的硫酸多糖具有多种生物活性,引起了越来越多的关注。动脉粥样硬化是导致人类大多数死亡的根本原因,对各个国家的影响巨大。内皮损伤是导致动脉粥样硬化的重要环节,而炎症反应和氧化应激与动脉粥样硬化的发展密切相关。本研究为细毛石花菜的高值化利用提供实验依据。首先从细毛石花菜中提取纯化硫酸多糖(GNP),对其理化性质和抗氧化活性进行分析。采用酸提取和柱层析相结合的方法,成功地从细毛石花菜中分离得到一种硫酸多糖。分析表明,GNP的相对分子质量为25.8 k Da,且单糖组成中半乳糖(63.05%)含量最高,符合红藻多糖的基本特征。并用傅立叶红外(Fourier Transform Infrared,FT-IR)光谱和氯化钡-明胶法证实了硫酸基团的存在(16.5%)。此外,还对GNP的抗氧化能力进行了研究。GNP羟自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、Fe2+螯合能力和DPPH自由基清除能力的IC50分别为13.56、2.215、2.688和7.408 mg/m L。其次利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)构建体外经典模型,研究GNP抗炎活性。结果表明,GNP在10-200μg/m L时对RAW264.7细胞没有毒性,可通过阻断丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)相关基因的表达来抑制核因子κB抑制蛋白(Nuclear factor kappa beta,NF-κB)信号通路,从而显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)的表达,最终抑制一氧化氮(Nitric Oxide,NO)的释放及炎症因子的产生。这些结果表明,GNP可能是制药和功能食品工业中的潜在抗炎成分。最后利用氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建体外模型,研究其抗动脉粥样硬化活性。Ox-LDL可导致内皮细胞损伤,从而导致动脉粥样硬化,与抗氧化、抗炎机制密切相关。结果表明,GNP(IC50=347.6μg/m L)以竞争性结合方式拮抗血管紧张素转换酶(Angiotensin-I converting enzyme,ACE),并且对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)有降压作用。同时,GNP在50-200μg/m L时对HUVEC细胞没有毒性,GNP可抑制氧化型低密度脂蛋白受体-1(Oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达,抑制ox-LDL诱导的细胞黏附分子的表达。此外,GNP还可以调节MAPK、PI3K/AKT和NF-κB信号通路,抑制细胞的凋亡、侵袭和迁移。这些结果为GNP作为防治动脉粥样硬化的潜在物质提供了理论依据。
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