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动物源性食品安全问题与我们生活密不可分。河豚毒素（Tetrodotoxin,TTX）存在于河豚鱼体内,作为一种天然非蛋白神经毒素,在动物源性食品安全问题中占据了重要地位,对TTX的检测也成为了诸多学者研究的重点。免疫学检测法简便、快速、灵敏,是近年来常用的检测方法。本研究以初步建立TTX的ELISA检测法为目的进行研究,以期为TTX在动物源性食品中的检测建立一种简便快速的方法。1.本实验使用甲醛作为偶联剂将TTX分别与钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）、牛血清白蛋白（Bovine albumin,BSA）偶联,获得人工合成抗原。对产物、载体蛋白、半抗原分别使用紫外扫描法及凝胶电泳法进行检测,初步判定偶联抗原合成成功。并通过免疫Balb/c小鼠,检测其鼠尾血清效价,证明所制备的完全人工抗原具有免疫原性,进一步证明人工抗原偶联成功。2.使用常规免疫方案对Balb/c小鼠免疫注射,鼠尾血清抗体效价大于1:4×105;利用细胞融合、ELISA检测等技术筛选单克隆抗体,获得三株可稳定分泌TTX抗体的细胞株A3D6、F10G4、D9F3;使用抑制率最高的A3D6细胞株通过小鼠体内诱生法大量制备单克隆抗体,并进行纯化,SDS-PAGE检测证明纯化后腹水杂蛋白含量明显减少,纯化完全;BCA法检测腹水蛋白浓度为34.84mg/ml,腹水经硫酸铵沉淀、亲和层析纯化后腹水浓度为0.98mg/ml,腹水蛋白回收率为9.51%。抗体亚型检测显示本株单抗亚型为重链IgG1,轻链Kappa型。ELISA法检测抗体亲和力结果显示该株抗体亲和力为4.8×108L/mol,抗体亲和力较高。3.利用间接ELISA及间接竞争ELISA技术对纯化后的A3D6单克隆抗体建立TTX的ELISA检测法,经优化后的条件为:包被抗原1:2500倍稀释,37℃包被1h,1%BSA37℃封闭1h,单克隆抗体1:6000稀释,与TTX标准品板外混匀后添加到酶标板中37℃孵育30min,使用1:1×104稀释的二抗37℃孵育30min,TMB显色15min,2M浓硫酸终止,酶标仪读取OD450值。该条件下建立检测法发现在5-200ng/ml时标准曲线线性良好,线性方程为y=0.4071x–r0.1671,R2=0.9909,半数抑制率IC50=42.52ng/ml,最低检测限LOD=3.03ng/ml。样品基质干扰检测结果显示当螺肉稀释10倍,贝肉稀释5倍时基本可以去除样品基质的干扰,添加回收试验显示平均加标回收率为90%,平均变异系数为10%。综合以上研究结果,本研究成功制备了人工完全抗原KLH-TTX、BSA-TTX;使用KLH-TTX作为免疫原免疫小鼠能够有效产生抗血清,取脾细胞进行细胞融合后筛选出能够稳定分泌高特异性及高抑制率的TTX单克隆抗体细胞株A3D6;根据该细胞株初步建立了TTX的ELISA检测法,标准曲线线性范围良好,为生产生活中TTX的检测应用打下良好基础。