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目的脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI）是缺血性脑卒中再灌注治疗所面临的严重并发症。减少神经细胞凋亡是改善患者生存质量的关键。过氧化物酶1（Peroxirodoxin1,Prdx1）作为抗氧化酶家族中的一员,在多种疾病的病理生理过程中发挥重要的作用,而其对CIRI中神经细胞凋亡的作用尚不清楚。本研究旨在探讨Prdx1基因敲减对小鼠脑神经瘤N2a细胞氧糖剥夺/复氧（oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）损伤后细胞凋亡的作用及其相关机制。方法本实验采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术靶向敲减N2a细胞中Prdx1的表达,并通过OGD/R损伤模型模拟CIRI。实验分为四个部分,第一部分检测小干扰RNA（Small interference RNA,si RNA）的转染效率,获得Prdx1基因敲减的N2a细胞,实验分为三组:正常对照组（Control组）、阴性对照组（si NC组）与干扰组（si Prdx1组）。设计并合成Prdx1 si RNA、NC si RNA,应用ribo FECT CP Transfection Kit转染试剂介导si RNA转染N2a细胞,在细胞转染后48小时,通过荧光显微镜观察转染组细胞的荧光情况,利用RT-q PCR及Western blot技术分别检测各组细胞Prdx1的m RNA及蛋白表达水平。第二部分探究Prdx1基因敲减对OGD/R后N2a细胞损伤及JNK/Caspase-3通路的调控作用,实验分为四组:正常对照组（Control组）、氧糖剥夺/复氧组（OGD/R组）、NC si RNA转染+氧糖剥夺/复氧组（si NC+OGD/R组）及Prdx1 si RNA转染+氧糖剥夺/复氧组（si Prdx1+OGD/R组）。除正常对照组外,各组N2a细胞进行氧糖剥夺8小时及复氧24小时处理。采用CCK-8比色法检测细胞活力,乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）释放率评估细胞毒性,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blot检测Prdx1、JNK、磷酸化JNK（p-JNK）及凋亡执行蛋白Cleaved caspase-3的蛋白表达水平。第三部分探究OGD/R后N2a细胞凋亡与JNK/Caspase-3通路的关系,实验分为三组:正常对照组（Control组）、氧糖剥夺/复氧组（OGD/R组）及氧糖剥夺/复氧+JNK活化抑制剂（SP600125）组（OGD/R+S P600125组）。采用TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blot检测JNK、p-JNK及Cleaved caspase-3的蛋白表达水平。第四部分探究Prdx1基因敲减是否通过JNK/caspase-3通路介导OGD/R后N2a细胞凋亡,实验分为五组:正常对照组（Control组）、氧糖剥夺/复氧组（OGD/R组）、NC si RNA转染+氧糖剥夺/复氧组（si NC+OGD/R组）、Prdx1 si RNA转染+氧糖剥夺/复氧组（OGD/R+si Prdx1组）及Prdx1 si RNA转染+氧糖剥夺/复氧+JNK活化抑制剂（SP600125）组（si Prdx1+OGD/R+SP600125组）。采用TUNEL染色法检测细胞凋亡;Western blot检测JNK、p-JNK及Cleaved caspase-3的蛋白表达水平。结果1.在荧光显微镜下转染组细胞发出明亮的红色荧光,表明si RNA成功转染至N2a细胞中;与Control组相比,si Prdx1组细胞Prdx1的m RNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）。2.与Control组相比,OGD/R组N2a细胞活力显著降低（P＜0.001）,LDH释放率显著增高（P＜0.001）,细胞凋亡数目显著增多（P＜0.001）,Prdx1、p-JNK及Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著增高（P＜0.001）;与OGD/R组相比,si Prdx1+OGD/R组N2a细胞活力进一步降低（P＜0.001）,LDH释放率进一步增高（P＜0.001）,细胞凋亡数目进一步增多（P＜0.01）,Prdx1蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）,而p-JNK及Cleaved caspase-3蛋白表达水平进一步增高（P＜0.001）,表明Prdx1基因敲减促进了OGD/R后N2a细胞凋亡,可能与JNK/Caspase-3通路进一步激活有关。3.与OGD/R组相比,OGD/R+SP600125组N2a细胞凋亡水平显著降低（P＜0.01）,p-JNK及Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）,表明JNK/Caspase-3通路参与介导OGD/R后N2a细胞凋亡。4.与si Prdx1+OGD/R组相比,si Prdx1+OGD/R+SP600125组N2a细胞凋亡数目显著减少（P＜0.01）,p-JNK及Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）,表明SP600125抑制了Prdx1基因敲减对OGD/R后N2a细胞凋亡的促进作用,JNK/Caspase-3通路参与Prdx1对OGD/R后N2a细胞凋亡的调控。结论N2a细胞经过OGD/R处理后Prdx1表达增高,转染si RNA靶向敲减Prdx1的表达可加剧OGD/R诱导的N2a细胞凋亡,并进一步激活JNK/Caspase-3通路,JNK活化抑制剂SP600125部分逆转了Prdx1基因敲减对OGD/R后N2a细胞凋亡的促进作用,提示Prdx1可能通过抑制JNK/Caspase-3通路的激活来减少OGD/R后N2a细胞凋亡。