缺氧诱导因子-1α、葡萄糖转运蛋白-1在宫颈鳞癌中的表达及其与血管生成的关系

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子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,严重威胁广大妇女的健康和生命。近40年来由于宫颈细胞学筛查的普遍应用及HPV检测技术的不断进展,使宫颈癌和癌前病变得以预防、早期发现和治疗,而如何控制宫颈癌的发生发展及探讨其转移的机制成为当前的首要问题。 缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)是一种重要的缺氧应答调控因子,能与缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)上的特定位点结合,启动靶基因的转录,使机体对缺氧产生一系列适应性反应。葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)是一种膜性易化葡萄糖转运蛋白,是HIF-1α重要的靶基因。二者均与肿瘤关系密切,涉及肿瘤发生发展等多个方面,成为近年来研究的热点。关于二者在宫颈癌中表达的相关性研究,尚未见报道。本研究利用免疫组化方法检测HIF-1α、GLUT-1在不同宫颈组织中的表达情况,明确两者的相关性,并探讨二者与宫颈癌血管生成的关系。 材料与方法: 一、研究对象 收集2002年1月-2005年12月中国医科大学宫颈癌手术切除的石蜡标本34例,术前均未进行放疗及化疗。患者年龄25-70岁,中位年龄43岁。根据FIGO2000临床分期标准:I期16例,Ⅱ期18例;肿瘤大小:大于4cm 15例,小于4cm 19例;分化程度:高分化13例,中低分化21例;淋巴结有转移者15例,没有19例。同时取CIN 10例及正常宫颈上皮10例作对照。 二、试剂 浓缩性兔抗人HIF-1α多克隆抗体购自武汉博士德生物有限公司。即用性兔抗人GLUT-1单克隆抗体、即用性兔抗人CD34单克隆抗体、链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(SP)超敏试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)显色剂购自福州迈新生物技术有限公司。柠檬酸抗原修复缓冲液及3%过氧化氢溶液自行配制。 三、实验方法 采用免疫组化SP法,按试剂盒说明进行。其中一抗稀释浓度为l:200。本研究以已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照,以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为空白对照,每例标本常规进行苏木素染色。 四、结果判定 (一)HIF-1α和GLUT-1: 按照Batchtiary等<[1]>的方法,综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比,进行半定量处理,即染色弱者为1分,染色清晰者为2分,染色强者为3分;阳性细胞数0-10%为1分,11%-50%为2分,51%-80%为3分,>80%为4分,最终评分为上数两项评分的总分。总分<3分者为阴性表达(一),≥3分者为阳性表达(+),≥5分者为中度阳性表达(++),≥7分者为强阳性表达(+++)。 (二)MVD计数测定 按照Weidner<[2]>的方法,用抗CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞。癌细胞间质内孤立的棕黄色血管内皮细胞或细胞簇或血管腔面积小于8个红细胞,且血管壁无肌层者,代表一条单独的微血管。先在低倍视野下找到肿瘤组织内MVD最高的区域,然后在高倍视野下计数3个视野的微血管数目,取其平均值作为高倍视野下的MVD。MVD<30记为(-),≥30记为(+),≥50记为(++)。 五、统计学方法 采用SPSS 13.0软件系统,率的比较采用X<2>检验或四格表的Fisher’s精确概率检验,等级相关采用Spearman分析。以P<0.05为有统计学意义。 结果: ①HIF-1α、GLUT-1在宫颈癌和CIN中的表达明显高于正常宫颈上皮。 ②宫颈癌中,HIF-1α表达与患者年龄、肿瘤大小、病理类型及分化程度无相关性,而与淋巴结转移情况及临床分期相关(P<0.05);GLUT-1表达与分化程度、淋巴结转移情况及临床分期相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小及病理类型无相关性。 ③HIF-1α、GLUT-1表达水平及MVD间存在正相关。 结论: ①HIF-1α、GLUT-1蛋白的过度表达可能与宫颈癌的发生、发展有关,二者均可能促进宫颈癌血管的生成。 ②HIF-1α可能提高GLUT-I的表达。
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