siRNA沉默survivin诱导肝癌细胞凋亡和内质网应激蛋白的表达

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目的研究siRNA沉默肝癌细胞内survivin基因的表达及其诱导细胞凋亡的效应,以及对内质网应激蛋白基因表达的影响。方法采用脂质体转染技术,将针对survivin编码基因的不同序列siRNA重组质粒psiRNA-survivin1、psiRNA-survivin2,以及psiRNA- survivin1+2分别转染至人肝癌细胞株HepG2。采用流式细胞术(FCM)和倒置荧光显微镜检测转染效率;Real-Time PCR检测实验组与对照组细胞内survivin和内质网应激蛋白mRNA的表达;倒置显微镜和Annexin-V/PI双染后FCM检测实验组与对照组肝癌细胞凋亡率。结果1.psiRNA-survivin1与psiRNA-survivin2以及psiRNA-survivin1+2转染人肝癌细胞株HepG2,Real-Time PCR以及FCM结果显示,psiRNA-survivin1+2沉默基因以及诱导细胞凋亡与其他组相比最为明显,而psiRNA-survivin2的效果要强于psiRNA-survivin1;2.转染质粒psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌细胞株HepG2与转染无关质粒pgenesil8-HK和未转染对照组比较,转染psiRNA-survivin1/2/1+2的肿瘤细胞内survivin mRNA表达水平显著降低,转染无关质粒pgenesil8-HK与未转染对照组比较无显著差异;3.转染psiRNA-survivin1/2/1+2后,细胞凋亡率明显增高;4.转染psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌细胞株HepG2与转染无关质粒pgenesil8-HK与未转染对照组比较,转染psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌细胞株内质网应激蛋白mRNA表达水平升高,其中psiRNA-survivin1+2作用组升高最为明显,转染无关质粒pgenesil8-HK与未转染对照组比较无显著差异。结论siRNA能够沉默人肝癌细胞株HepG2细胞中survivin基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,并且证明psiRNA-survivin1+2沉默survivin基因的表达以及诱导细胞凋亡效应最好;进一步研究结果表明siRNA沉默survivin后亦可上调HepG2细胞内内质网应激蛋白基因的表达,其机制及其意义有待进一步研究阐明。
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